[发明专利]一种检测CLLU1基因mRNA表达量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域的荧光定量PCR技术，具体涉及一种检测CLLU1基因mRNA表达量的试剂盒。

背景技术

慢性淋巴细胞白血病（The chronic lymphocytic leukemia upregulated，CLL）是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性肿瘤，以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚集为特征。CLL是成人最常见白血病之一，约占所有白血病的四分之一。CLL在西方国家发病率较高，男性发病率可达3/10万人口以上，女性也接近2/10万人口，但在我国、日本及东南亚国家发病率较低。CLL是一种成年人的疾病，但是，在极少数情况下，它可以发生在青少年中，偶见于儿童。新诊断的CLL患者大多数（>75％）为50岁以上，多数是男性。CLL患者是一个异质性群体，在发病的形式、疾病进展、治疗反应和生存期方面具有明显的个体差异。

近年来Buhl等人通过差异显示的方法发现了位于12q22区域的新基因：慢性淋巴细胞白血病上调基因1（CLL upregulated gene 1，CLLU1）在CLL细胞中呈特异性表达。CLLU1基因被认为是最新的CLL的预后指标，该基因对于CLL显示出具有特异性，CLLU1基因转录产物仅见于CLL细胞中，CLL细胞的CLLU1基因表现出高度的表达水平。目前，对于CLLU1基因的具体功能尚不完全清楚，经研究表明，这种基因的高度表达与治疗时间长短以及70岁以下的患者总生存期低密切相关，且CLLU1基因表达水平与已知CLL不良预后因素有密切关系。CLLU1基因表达可以显着提高其他技术，如：FISH（荧光原位杂交）、IgVH突变分析、CD38和ZAP-70，特别是IgVH突变，来评估CLL患者预后的价值。

目前可用探针杂交法、质谱法、定性PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）法、基因测序法和流式细胞术等方法对CLLU1基因定量的表达进行检测。探针杂交法假阳性率较高；基因芯片法成本高、制备方法繁琐；基因测序法的敏感性和特异性高，但价格比较昂贵，而且操作繁琐，耗时长；流式细胞术涉及多环节，操作复杂，分析报告带有一定的主观性；定性PCR法具有特异性强和灵敏度高等优点。但实时荧光定量PCR技术实现了PCR从定性到真正意义的定量的飞跃，为人类疾病基因的定量检测提供了一个行之有效的检测工具，与普通PCR相比具有特异性增强、灵敏度提高和检测快速、降低了污染等特点，但目前尚未有实时荧光定量PCR方法检测慢性淋巴细胞白血病中的CLLU1基因的相关报道。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种检测CLLU1基因mRNA表达量的试剂盒。所述技术方案如下：

本发明所提供的检测AML1-ETO融合基因mRNA表达量的试剂盒，包括检测用引物、荧光探针、cDNA第一链合成试剂、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，所述检测用引物、荧光探针包括CLLU1基因引物、内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，其中：

CLLU1基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；

CLLU1基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

CLLU1基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；

ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；

ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；

ABL基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；

所述cDNA第一链合成试剂含有MgC1₂、逆转录酶缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂、Oligo(dT)₁₅、AMV逆转录酶和无RNase去离子水；所述荧光定量PCR混合液含有PCR预混合液、Mg²⁺、dNTPs、dUTP、Taq酶、UNG酶和无RNase去离子水。

进一步地，所述试剂盒还包括内部阳性控制序列、内部阳性控制序列的引物和Taqman荧光探针，其中：内部阳性控制序列如序列表中SEQ ID NO:7所示；内部阳性控制序列的上游引物如序列表中SEQ ID NO:8所示；内部阳性控制序列的下游引物如序列表中SEQ IDNO:9所示；内部阳性控制序列的Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:10所示。