[发明专利]提高上面发酵小麦啤酒中4-乙烯基愈创木酚含量的方法

权利要求书

1.一种提高上面发酵小麦啤酒中4-乙烯基愈创木酚含量的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）从枯草芽孢杆菌中通过PCR扩增PADC基因，PADC基因核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，PCR扩增引物序列如下：

上游引物：F-padc5’-GCG TCTAGA ATGGAAAACTTTATCG-3’

下游引物：R-padc5’-GCG AAGCTT TTATAATCTTCCCGC-3’；

（2）将步骤（1）制得的PADC基因经纯化后，经内切酶XbaI和内切酶HindIII双酶切后与同样经内切酶XbaI和内切酶HindIII双酶切的质粒YEp352连接，制得重组质粒YPADC，将重组质粒YPADC转化至上面发酵酵母W303-1A，获得上面发酵重组酵母菌株W303+padc；

（3）利用11°P麦汁对步骤（2）制得的上面发酵重组酵母菌株W303+padc进行扩大培养，培养条件为：25～28℃摇床，220～240r/min，获得上面发酵酵母W303+padc；

（4）将步骤（3）制得的上面发酵酵母W303+padc接种于11°P麦汁中，在温度为16～18℃进行发酵培养至糖度为4°P时，密封发酵容器保压至双乙酰含量低于0.1mg/L，降温至0～2℃，保存5～8天，制得4-乙烯基愈创木酚含量为1.6～1.8mg/L的啤酒。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，PCR反应程序为：94℃预变性3min；94℃模板变性30s，52.6℃引物退火30s，72℃引物延伸45s，30个循环；72℃延伸10min。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，重组质粒YPADC转化上面发酵酵母W303-1A采用醋酸锂转化法。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）和步骤（4）中的11°P麦汁的制备方法如下：大麦芽和小麦芽按重量比3：2混合后，以EBC标准磨进行粉碎，采用浸出糖化法经糖化后，经过滤、煮沸后，制得11°P麦汁。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，上述糖化的具体步骤为：投料温度为37℃，保持20min；升温至45℃保持30min，然后升温至52℃保持40min；再升温至65℃，保持70min；最后升温至78℃浸出即可。