[发明专利]人hcrcn81的原核重组质粒及其所表达的蛋白与兔抗人多克隆抗体及用途无效
申请号: | 201210445862.6 | 申请日: | 2012-11-09 |
公开(公告)号: | CN102936604A | 公开(公告)日: | 2013-02-20 |
发明(设计)人: | 陈尧;温晓霞;王凯程 | 申请(专利权)人: | 四川大学 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/74;C07K14/47;C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68 |
代理公司: | 成都科海专利事务有限责任公司 51202 | 代理人: | 黄幼陵;马新民 |
地址: | 610065 四川*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | hcrcn81 重组 质粒 及其 表达 蛋白 兔抗人多 克隆 抗体 用途 | ||
1.一种人hcrcn81的原核重组质粒,其特征在于由序列表中SEQ ID NO.1中的基因片段与原核表达载体构建而成,所述基因片段是SEQ ID NO.1中第73位至第573位的核苷酸序列,所述的基因片段正向插入原核表达载体。
2.根据权利要求1所述人hcrcn81的原核重组质粒,其特征在于原核表达载体为pET质粒系统,包括pET-28a 、pET-30a、pET-32a或 pET32a (+)。
3.一种重组人HCRCN81蛋白质,其特征在于由权利要求1或2所述的原核重组质粒表达而成,其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所述。
4.一种兔抗人多克隆抗体,由权利要求3所述重组人HCRCN81蛋白质免疫新西兰大耳白兔后收集抗血清纯化得到。
5.根据权利要求4所述兔抗人多克隆抗体,其特征在于制备方法依次包括以下步骤:
(1)通过RT-PCR反应,获得人HCRCN81蛋白质编码基因,即序列表SEQ ID NO.1中第73位至第573位的核苷酸序列;
(2)将步骤(1)扩增的人HCRCN81蛋白质编码基因插入到原核表达载体构建原核重组质粒,再将所述原核重组质粒转化至感受态细菌中进行培养,然后筛选出含有正确插入片段的克隆;
(3)利用PCR扩增和限制性内切酶酶切图谱分析所述原核重组质粒,并进行DNA序列分析;
(4)将正确克隆的原核重组质粒转化入工程菌中进行表达,分离纯化表达的蛋白即获得重组人HCRCN81蛋白质;
(5)采用SDS-PAGE、质谱分析鉴定重组人HCRCN81蛋白质的正确性;
(6)将所述重组人HCRCN81蛋白质免疫新西兰大耳白兔后收集抗血清;
(7)采用抗原亲和纯化方法从步骤(6)所收集的抗血清中获得兔抗人多克隆抗体。
6.权利要求4所述兔抗人多克隆抗体在制备检测人癌细胞和人组织中hcrcn81基因所表达的蛋白质的检测剂方面的应用。
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