[发明专利]一种基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法有效
| 申请号： | 201210445958.2 | 申请日： | 2012-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN102899418A | 公开（公告）日： | 2013-01-30 |
| 发明（设计）人： | 樊春海;闻艳丽;林美华 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海应用物理研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 邓琪;宋丽荣 |
| 地址： | 201800 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 dna 三维 纳米 结构 探针 电化学 mirna 检测 方法 | ||
1.一种基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，包括：（1）通过自组装的方法合成DNA三维纳米结构探针，所述的DNA三维纳米结构探针包括延伸出的一段识别序列；（2）将所述的DNA三维纳米结构探针组装到电化学装置的工作电极表面；（3）将目标miRNA与所述工作电极表面的所述DNA三维纳米结构探针杂交；（4）加入氧化还原酶和相应的底物，使用电化学装置进行电化学检测。
2.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，所述的DNA三维纳米结构探针是由四条单链DNA自组装形成的四面体探针，所述的四条单链DNA中的三条单链DNA的5'端修饰有巯基，另一条单链DNA在一端延伸出所述识别序列。
3.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，还包括将另一DNA三维纳米结构探针组装到所述电化学装置的工作电极表面，所述另一DNA三维纳米结构探针不具有所述识别序列。
4.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，所述的电化学装置的工作电极是金电极，通过巯基和金之间的金硫键将所述DNA三维纳米结构探针组装到电化学装置的工作电极表面。
5.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，DNA信号探针、所述DNA三维纳米结构探针与所述目标miRNA形成夹心结构。
6.如权利要求5所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，所述DNA信号探针的序列和所述DNA三维纳米结构探针的所述识别序列彼此相邻地与所述目标miRNA的整个序列互补。
7.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，所述目标miRNA的浓度为10aM-10nM。
8.如权利要求7所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，所述目标miRNA的浓度为10fM-10nM。
9.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，所述目标miRNA的序列选自：SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22。
10.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（4）中，所述的氧化还原酶为亲和素修饰的辣根过氧化物酶或多聚的亲和素修饰的辣根过氧化物酶。
11.如权利要求1所述的基于DNA三维纳米结构探针的电化学miRNA检测方法，其特征在于，在所述步骤（4）中，所述的底物是TMB和双氧水。
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