[发明专利]末端连接脯氨酸的聚乙二醇的酸或活性酯的制法和应用

权利要求书

1.一种末端连接脯氨酸的聚乙二醇的酸或活性酯，其特征在于，结构如下：

R₁－(OCH₂CH₂)_n－O－R₂

其中n＝43~680；

R₁可以是CH₃－，也可以是R₂

R₂的结构如下：

R₃可以是H－，也可以是－N－丁二酰亚胺基。

2.根据权利要求1所述的末端连接脯氨酸的聚乙二醇的活性酸或酯，其特征在于，所说的酸或酯为：

此处NHS代表N-羟基丁二酰亚胺。

3.根据权利要求1或2所述的末端连接脯氨酸的聚乙二醇的活性酸或酯的制备方法包括如下步骤：

（1）将聚乙二醇溶于甲苯中，加入叔丁醇钾回流反应1~2小时，加入溴乙酸乙酯回流反应2~4小时，然后室温反应18~24小时，浓缩后用乙醚沉淀，沉淀物碱水解然后酸化，获得CM-PEG；

（2）将氯化氢气体通入含有脯氨酸的乙醇直到饱和，然后收集脯氨酸乙酯盐酸盐；

（3）取步骤（1）中制备的CM-PEG溶于二氯甲烷，然后依次加入二环己基碳二亚胺、脯氨酸乙酯盐酸盐，然后用三乙胺将溶液的pH值调节到8~9，反应8~12小时，过滤，滤液加入乙醚，收集沉淀产物，将产物干燥后溶于水，加入氢氧化钠溶液调节pH至10~12，反应1~3小时，然后用草酸将溶液pH调节到2~4，收集产物，获得末端连接脯氨酸的聚乙二醇衍生物；

（4）取步骤（3）的产物溶于二氯甲烷，加入1.5~3倍摩尔量的二环己基碳二亚胺和1.5~3倍摩尔量的N-羟基丁二酰亚胺，10~30℃搅拌反应20~28小时，收集产物，获得末端连接脯氨酸的聚乙二醇活性酯。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，脯氨酸可以是D型、L型或外消旋体。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述的聚乙二醇可以为单甲氧基聚乙二醇，也可以为双羟基聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量为2000~30000 Da。

6.根据权利要求1或2所述的末端连接脯氨酸的聚乙二醇活性酸或酯的应用，其特征在于，用于与蛋白质或酶相连接，制备具有PEG修饰的蛋白质或酶。

7.一种权利要求1或2所述的末端连接脯氨酸的聚乙二醇活性酸或酯与生物活性物质的结合物，其特征在于，结构通式如下：

其中：n为1或2，NH-Pro部分代表生物活性物质的氨基位点。

8.根据权利要求7所述的修饰物，其特征在于生物活性物质选自蛋白质、酶、多肽、药物、染料、核苷、酯类或脂质体。