[发明专利]一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法

权利要求书

1.一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法，其特征在于FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建是按照以下步骤进行的：

一、采用异硫氰酸胍法提取蒙古柳的总RNA，然后采用试剂盒对提取的蒙古柳总RNA反转录成总cDNA；

二、将步骤一反转录的总cDNA连接到pGEM-T载体上，构建出pGEM-cDNA，转化大肠杆菌JM109感受态细胞中，构建了pGEM-cDNA在大肠杆菌JM109中的文库；

三、将步骤二得到的pGEM-cDNA和pBI121载体，采用AsiSI和AscI酶分别进行双酶切，然后将酶切后的目的片段与酶切后的pBI121载体进行连接，得到植物二元表达载体pBI121::cDNA；

四、将步骤三得到的植物二元表达载体pBI121::cDNA，转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中，构建出JM109菌株的pBI121::cDNA克隆文库，提取JM109菌株的pBI121::cDNA克隆文库的DNA；

五、将步骤四得到的JM109菌株的pBI121::cDNA克隆文库的DNA通过电击转化导入根癌农杆菌EHA105菌株中，即完成蒙古柳FOX hunting农杆菌cDNA文库的构建。

2.根据权利要求1所述的一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法，其特征在于步骤二中所述的转录的总cDNA连接到pGEM-T载体的连接体系为：

连接反应条件：16℃水浴，12～14h。

3.根据权利要求1所述的一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法，其特征在于步骤三中所述的AsiSI和AscI酶切体系为：

反应条件：37℃水浴，2～3h。