[发明专利]检测小麦籽粒脂肪氧化酶活性的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测小麦籽粒脂肪氧化酶活性的引物对及其应用。

背景技术

小麦是我国的主要储粮作物之一，良好的储粮品质对粮食安全具有重要意义。在一般的储藏条件下，小麦从第二年开始逐渐陈化变质，南方高温高湿地区尤为明显。影响小麦储藏品质的因素较多，包括收获季节的气候条件、晾晒、运输、仓储等外在环境条件和脂肪氧化酶活性等内在因素，且脂肪氧化酶活性高低是直接影响小麦耐储藏性的主要内在原因。因此，开发LOX基因的分子标记，利用分子育种手段，培育耐存储的小麦品种，是解决粮食安全的重要途径之一。

1932年，Andre和Hou首次提出脂肪氧化酶（LOX或Lpx，lipoxygenase）的存在，在那以后LOX的研究取得快速的发展。研究者们先后在大豆、拟南芥、水稻、向日葵、黄瓜、亚麻、大麦和小麦等作物植株和籽粒中发现了LOX。目前，已有的研究表明，LOX活性低，有利于增强小麦等作物的耐储藏性。LOX基因在大麦中的研究较多，大麦LOX基因DNA序列已经发表（GenBank编号HVU83904）。在普通小麦中，对LOX的研究较少，王慧等研究发现，LOX活性在基因型间和环境间的差异皆达到极显著水平，且基因型对小麦LOX活性的效应大于环境及基因型与环境互作效应，认为基因型是影响小麦LOX活性的主要因素，但环境因素亦不可忽视。Hongwei Geng等在研究普通小麦的TaLox-B1时发现，TaLox-B1位点存在两个具有SNP的等位基因TaLox-B1a和TaLox-B1b，LOX活性较高的小麦品种含有TaLox-B1a，LOX活性较低的小麦品种含有TaLox-B1b。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测小麦籽粒脂肪氧化酶活性的引物对及其应用。

本发明所提供的检测小麦脂肪氧化酶活性的引物对，为由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对。

其中，序列1由21个核苷酸组成；序列2由23个核苷酸组成。

所述检测小麦籽粒脂肪氧化酶活性的引物对在检测小麦脂肪氧化酶活性中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种检测小麦脂肪氧化酶活性的方法。

本发明所提供的检测小麦脂肪氧化酶活性的方法具体可包括如下步骤：

（1）以待测小麦的基因组DNA为模板，以所述引物对进行PCR扩增，获得PCR

（2）检测步骤（1）所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦的脂肪氧化酶活性：若所述PCR产物中含有大小为677bp的DNA片段，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性高的小麦或候选为脂肪氧化酶活性高的小麦；若所述PCR产物中不含有大小为677bp的DNA片段，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性低的小麦或候选为脂肪氧化酶活性低的小麦。

在上述方法中，所述检测步骤（1）所得PCR产物的大小的方法是将所述PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，若所述PCR产物在琼脂糖凝胶电泳上显示677bp的一个条带，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性高的小麦或候选为脂肪氧化酶活性高的小麦；若所述PCR产物在琼脂糖凝胶电泳上不显示677bp的一个条带，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性低的小麦或候选为脂肪氧化酶活性低的小麦。

本发明所提供的检测小麦脂肪氧化酶活性的方法具体也可包括如下步骤：

（1）以待测小麦的基因组DNA为模板，以所述引物对进行PCR扩增，获得PCR产物；

（2）检测步骤（1）所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦的脂肪氧化酶活性：若所述PCR产物为大小分别是475bp、677bp和786bp的三个DNA片段，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性高的小麦或候选为脂肪氧化酶活性高的小麦；若所述PCR产物中为大小分别是475bp和786bp的两个DNA片段，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性低的小麦或候选为脂肪氧化酶活性低的小麦。

在上述方法中，所述检测步骤（1）所得PCR产物的大小的方法是将所述PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，若所述PCR产物在琼脂糖凝胶电泳上同时显示475bp、677bp和786bp三个条带，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性高的小麦或候选为脂肪氧化酶活性高的小麦；若所述PCR产物在琼脂糖凝胶电泳上同时显示475bp和786bp两个条带，则所述待测小麦为脂肪氧化酶活性低的小麦或候选为脂肪氧化酶活性低的小麦。