[发明专利]鸭病毒性肝炎活疫苗用耐热保护剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于动物用病毒性疾病活疫苗制造领域，尤其是涉及一种鸭病毒性肝炎活疫苗用耐热保护剂及其制备方法和应用。 

背景技术

鸭病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis，DVH)是由鸭病毒性肝炎病毒(DuckHepatitis Virus，DHV；属小核糖核酸病毒)引起的小鸭的一种急性传染病，对小鸭具有高度致死性。严重影响养鸭业的发展。临床上已报道有多种病毒可引起小鸭病毒性肝炎。已确定有小RNA病毒科1型鸭病毒性肝炎病毒、新血清型鸭病毒性肝炎病毒和1型鸭病毒性肝炎病毒变异株，以及星状病毒科的2型、3型鸭病毒性肝炎病毒等。我国自1980年在北京分离到本病毒并确定为血清1型鸭病毒性肝炎病毒以来，该病在全国各地均有不同程度的流行。1950年，Levine和Fabricant首次在美国长岛发现本病，并通过鸡胚分离到鸭病毒性肝炎病毒。以后各国均有本病流行的报道。我国于1963年由上海畜牧兽医研究所黄均健首次报道；北京大学王平、潘文石等在北京地区某鸭场分离到了鸭病毒性肝炎病毒。证实北京地区有本病发生。以后发现全国各地都有本病发生。 

本病主要危害1～3周龄的雏鸭，因此防治方法主要针对雏鸭。具体方法大体上可以为两大类，即雏鸭的被动免疫方法和主动免疫方法。雏鸭的被动免疫方法主要包括对雏鸭注射康复鸭血清、高免母鸭或母鸡的蛋黄匀浆；及用DHV免疫种鸭，使后代雏鸭获得蛋传抗体。雏鸭的主动免疫方法就是用各种DHV疫苗(鸡胚化弱毒、细胞毒、强毒灭活苗和弱毒灭活苗等)接种雏鸭，使其自身产生抗体，以达到防治DVH的目的。而无论是用以上方法免疫种鸭还是雏鸭，均很难在雏鸭10日龄之前产生足够效价的抗体，因此雏鸭在1-10日龄爆发鸭病毒性肝炎死亡率非常高且难以控制。 

弱毒活疫苗是预防畜禽传染病的主要疫苗之一，而目前国内没有一例鸭病毒性 肝炎活疫苗问世。究其原因主要有：(1)自然分离得到的鸭病毒性肝炎强毒株在人工复制病例中，不能稳定致死5日龄以上的雏鸭，要分离到够稳定致死7-8日龄雏鸭的鸭病毒性肝炎强毒非常困难。而没有强毒对照，就没有办法进行疫苗的后续研发工作；(2)获得1株免疫原性良好、毒力稳定，且疫苗免疫后抗体产生快，能够保护10日龄以内雏鸭的鸭病毒性肝炎致弱疫苗毒株也比较困难，研究发现该病毒致弱后往往免疫原性不佳或易发生毒力反强。 

此外，在疫苗保护剂方面，国内疫苗企业常用的疫苗保护剂主要是乳糖，牛奶，明胶等，组方简单，保护性差。如果在2℃～8℃条件下，保存期只有3～6个月，大多需要在-15℃以下保存。而国内传统的动物用疫苗保护剂的研制相对滞后，使疫苗的长期保存和长途运输受到很大限制，加上基层防疫部门缺乏必要的冷冻和冷藏设施，容易造成疫苗因保存不当而失效，导致疫苗免疫失败而造成疫病流行。所以，耐热保护剂的研究非常急需，发达国家在二十世纪八十年代就已开始进行耐热保护剂的研究，目前已经基本采用耐热冻干保护剂生产冻干疫苗，但由于保护剂的研究和应用属于专利资料，处于保密状况中。 

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种克服国产疫苗保存工艺落后现状，提高疫苗质量以及市场竞争力的鸭病毒性肝炎活疫苗用耐热保护剂及其制备方法和应用。 

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现： 

鸭病毒性肝炎病毒活疫苗用耐热保护剂，包括以下组分及重量百分比含量： 

明胶              3～8％、 

山梨醇            5～10％、 

尿素              1～3％、 

脂肪酸盐          0.5～2％、 

维生素C           1～3％、 

谷氨酸单钠        1～3％、 

磷酸氢二钾        1～2％、 

磷酸二氢钾        0.52％、 

双蒸水            余量。 

鸭病毒性肝炎活疫苗用耐热保护剂的制备方法，包括以下步骤： 

(1)将明胶、山梨醇按上述配比溶于双蒸水中，控制温度为108～121℃高压灭菌15～30min； 

(2)将尿素、脂肪酸盐、维生素C、谷氨酸单钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾按上述配比溶于双蒸水中，用0.22μm的滤膜除菌，然后其与步骤(1)中制备得到的组分1∶(1～1.2)混合，配制成耐热保护剂。 

步骤(1)与步骤(2)中配制溶液按(1～1.2)∶1混合，制备成耐热保护剂。