[发明专利]一种减弱反馈抑制菌株生产谷胱甘肽的方法

权利要求书

1.一种谷胱甘肽合成酶系重组质粒，其特征在于，重组质粒包括两个，分别由GSH1和GSH2序列和一段合适的载体片段连接而成，所述GSH1和GSH2序列分别如NCBI上Gene ID为242378250和253978924的序列所示，载体片段为pET28a和pBAD24。

2.如权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述GSH1和GSH2序列分别置于T7启动子、Lac操纵子之下和araBAD启动子、阿拉伯糖操纵子之下。

3.如权利要求1或2所述的重组质粒，其特征在于，所述两个重组质粒各包括一段抗性基因片段。

4.如权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述抗性基因片段分别为卡那霉素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因。

5.如权利要求1-4中任一项所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A)PCR扩增获得GSH1和GSH2序列；

B)将GSH1和GSH2序列分别克隆到合适的表达载体。

6.如权利要求1-3中任一项所述的双表达重组质粒用于转化累积谷胱甘肽的原始细菌株的应用。

7.一种提高谷胱甘肽累积量的生物合成方法，其特征在于，所述方法为，将权力要求1-3中任一项所述的共表达重组质粒转化累积谷胱甘肽原始细菌株，获得重组菌。

8.如权利要求6所述的应用和权利要求7所述的方法，其特征在于，所述累积谷胱甘肽的原始细菌株为大肠杆菌。

9.如权利要求8所述的应用和方法，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，通过发酵培养所述重组菌，并在发酵培养一定时间后，用诱导剂乳糖和阿拉伯糖诱导谷胱甘肽代谢途径中的两个关键酶基因GSH1和GSH2的表达，提高谷胱甘肽的累积量。