[发明专利]一种重组热带假丝酵母生产木糖醇的方法

权利要求书

1.一种重组热带假丝酵母工程菌株C.tropicalis PNL，其特征在于，将木聚糖酶和木糖苷酶基因表达盒串联在一起，导入酵母表达载体pAUR123中，构建重组质粒pAUR123-xyn-xyl，将该质粒导入木糖利用型热带假丝酵母中。 

2.如权利要求1所述的重组热带假丝酵母工程菌株C.tropicalis PNL，其特征在于，在木糖利用型热带假丝酵母中构建木聚糖降解途径，所述重组菌株能共表达木聚糖酶和木糖苷酶。 

3.如权利要求1所述的重组热带假丝酵母工程菌株C.tropicalis PNL，其特征在于，实现了木聚糖降解和木糖醇生产的耦合，能以天然半纤维素原料为底物进行全细胞法直接生产木糖醇。 

4.一种如权利要求1或2或3所述的热带假丝酵母工程菌株在利用玉米芯全细胞法发酵生产木糖醇中的应用。 

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述热带假丝酵母工程菌株C.tropicalis PNL可通过如下步骤应用于木糖醇生产： 

(1)菌体种子液的制备：在摇瓶中按10-50%的装液量加入种子培养基，种子培养基配方为：木糖(5-50g/L)、蛋白胨(1-10g/L)、酵母膏(1-10g/L)、K₂HPO₄(1-5gL)、MgSO₄·7H₂O(0.1-0.5g/L)、CaCl₂(0.1-0.5gL)，pH4.5-6.5，在100-130℃下灭菌10-30min后，在无菌条件下从活化平板上挑取单菌落接入上述摇瓶中，培养温度为30-40℃，摇床转速为150-300rpm，培养时间为12-30h，得到菌体种子液备用。 

(2)木糖醇的全细胞法发酵生产：在无菌条件下将上述步骤1制备好的菌体种子液，按1-15%的接种量接入盛有发酵培养基的摇瓶，装液量为20-80%。所用发酵培养基配方为葡萄糖5-40gL、蛋白胨5-40g/L、酵母膏5-30g/L、玉米芯粉10-50gL，pH4.5-6.5。控制发酵温度为30-40℃，摇床转速为150-300rpm，发酵时间为24-120h。 

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述的种子培养基木糖含量为5-25gL，蛋白胨含量为3-8gL，酵母膏含量为1-5gL，K₂HPO₄含量为1-3g/L，MgSO₄·7H₂O含量为0.1-0.3g/L，CaCl₂含量为0.1-0.3g/L，pH4.5-5.5。 

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述的培养条件为：种子培养基装液量为15-35%，培养温度为32-38℃，摇床转速为160-200rpm。 

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述的发酵培养基葡萄糖含量为10-25gL，蛋白胨含量为1-25gL，酵母膏含量为5-15g/L，玉米芯粉含量为10-30gL，pH4.5-5.5。 

9.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述的培养条件为：接种量为3-10%，发酵培养基装液量为30-60%，培养温度为32-38℃，摇床转速为160-200rpm，发酵时间为60-100h。