[发明专利]以β-环糊精为键合固定相的毛细管电色谱柱的制备方法及在手性药物分离中的应用

权利要求书

1.一种以β-环糊精为键合固定相的毛细管电色谱柱的制备方法，其特征在于，以β-环糊精为起始反应物，采用分步合成法，依次合成六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精、六位单取代的氨化-β-环糊精、硅烷化硅胶以及β-环糊精键合硅胶手性固定相，将β-环糊精键合硅胶手性固定相装填至毛细管柱中，制备成毛细管填充柱。

2.根据权利要求1所述的以β-环糊精为键合固定相的毛细管电色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①.六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精的制备：

a.在烧杯中加入200ml蒸馏水，加热至微沸，称取40gβ-环糊精，搅拌加入至溶解，趁热快速抽滤，滤液于冰箱中放置12h，β-环糊精结晶析出，抽滤，得重结晶后的β-环糊精，按上述步骤β-环糊精重结晶3次，将所得3次重结晶的β-环糊精置于真空干燥箱中80℃干燥12 h，备用；

b.对甲苯磺酰氯重结晶及其乙腈溶液的制备，称取对甲苯磺酰氯10g，加入30ml石油醚，置于加热套中加热至60～90℃使之溶解，放置室温18-25℃，并于4℃冷藏12h，抽滤，得重结晶的对甲苯磺酰氯，按上述步骤重结晶3次，再置真空干燥箱中25℃干燥4h，得3次重结晶的对甲苯磺酰氯，称取5.04g 3次重结晶的对甲苯磺酰氯溶于15ml乙腈中，成对甲苯磺酰氯乙腈溶液，备用；

c.六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精合成方法，称取30g步骤a中3次重结晶后的β-环糊精于三颈烧瓶中，加入250ml蒸馏水，室温18-25℃下，逐滴加入浓度为0.335g/ml氢氧化钠溶液10ml，搅拌1h，冰浴中在45-55min内逐滴加入步骤b中制备的对甲苯磺酰氯乙腈溶液15ml，继续搅拌20min，抽滤，滤液用质量浓度为10%的盐酸调至pH=8，4℃冷藏12h，过滤，得固体物，固体物在真空干燥箱中50℃干燥12h，成磺酰化反应粗产物，称取25g的磺酰化反应粗产物，置于加热套中加水加热，至其完全溶解，再冷却至室温18-25℃，冷藏12h，抽滤，得重结晶产物，按上述步骤重结晶3次，得3次重结晶的产物六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精，再置于真空干燥箱中，在50℃下干燥12h，用NMR及TLC验证六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精的纯度，放于干燥器中，备用；

②.六位单取代的氨化-β-环糊精的制备：

称取步骤①的c步骤中制备的六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精3.0g，溶于45ml乙二胺，均匀混合后，于80℃下反应4h，反应结束后，旋蒸除去未反应的过量乙二胺，再将剩余的混合物均匀分散在-10℃的冰丙酮中，沉淀析出粗产物，粗产物用体积浓度为10%的甲醇溶液溶解，再用丙酮沉出，如此反复3-5次，得沉出物，真空干燥后，得白色产物，即为六位单取代的氨化-β-环糊精，用核磁共振氢谱表征制备的六位单取代氨化-β-环糊精；

③.硅烷化硅胶的制备：

用γ-(2，3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷，即KH-560作为担体，利用KH-560的乙氧基与硅胶表面的硅羟基反应，制备得到硅烷化硅胶，即硅胶KH-560，方法是：

a.硅胶活化

将硅胶表面的金属离子除去，使硅胶表面的硅醇基裸露的更多，从而使更多的环糊精可以键合到硅胶的表面，以提高键合量，方法是：称取1.0g高效液相色谱硅胶，加到三口烧瓶内，用7.5ml质量浓度为20%的盐酸溶液，110℃加热搅拌回流6h，在室温18-25℃下过滤，以超纯水洗涤滤饼，直至pH呈中性，在真空干燥箱中120℃下干燥12h，得活化后的硅胶，置于干燥器中备用；

b.硅胶KH-560合成

称取上述活化后的硅胶0.5g于三颈瓶中，加入5ml无水甲苯和30μl三乙胺，形成混悬液，在氮气保护下加入250μl KH-560，100～120℃搅拌回流10h，反应完成后，抽滤，依次用无水甲苯，无水乙醚，丙酮，甲醇各洗涤3次，80℃真空干燥12h，得硅烷化硅胶，即硅胶KH-560；

④.β-环糊精键合硅胶手性固定相的制备：

将步骤③的b步骤中制备的硅胶KH-560置于真空干燥箱120℃真空干燥12h，称取0.2g干燥后的硅胶KH-560和步骤②中制备的六位单取代氨化-β-环糊精1.0g，置于单口烧瓶中，再加入10ml无水甲苯，氮气保护，110℃加热搅拌回流10h，反应完成后，抽滤，用甲醇、丙酮和水洗涤3-5次，60℃于真空干燥箱中干燥12 h，得β-环糊精键合硅胶手性固定相；

⑤.毛细管填充柱的制备：

将β-环糊精键合硅胶手性固定相按申请公开号为CN102512849A的方法，填充到毛细管柱中，并烧制柱塞，制备成毛细管填充柱，即可。