[发明专利]以β-环糊精为键合固定相的毛细管电色谱柱的制备方法及在手性药物分离中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及分离技术，特别是一种以β-环糊精为键合固定相的毛细管电色谱柱的制备方法及在手性药物分离中的应用。

背景技术

毛细管电色谱目前是一种较新的分离技术，它主要是基于色谱分离机制进行的。在毛细管中填充、涂敷或键合固定相，使被分离组分在固定相中进行保留和分配。由于毛细管电色谱是基于液相色谱和毛细管电泳技术相结合的一种分离技术，所以它具有良好的选择性和较高的分离效率。根据固定相不同的填充方法，毛细管电色谱可以分为3个亚型，即毛细管开管柱（OTC-CEC），毛细管填充柱（PC-CEC）和毛细管整体柱（MC-CEC）。

填充毛细管电色谱是把固定相填充到毛细管中的一种电色谱技术，它是毛细管电色谱最常用的一种技术，因为它有分离效率高，固定相资源丰富等优点，所以应用范围较广。

环糊精(CD)是一类研究很多的超分子化合物，由于环糊精中的各个葡萄糖基都不能绕糖苷键自由旋转，因此环糊精的形状呈锥体圆桶形。圆筒的内侧是以糖苷氧原子连结C-H组成的环，呈现相对的疏水性，可以接受不同类型的客体化合物，尤其是那些非极性基团。环糊精空穴的外环为一级和二级羟基，使得环糊精外部呈亲水性。CD有多个手性中心，其促使对映体分离的基本原理是在它们之间形成包合物，而不同包合物的稳定常数不同，从而实现分离。由于环糊精类手性选择剂拥有很多手性中心、每个葡萄糖单元都是固定的椅式结构，使得环糊精具有很多结合部位，如β-环糊精有35个不同的结合部位，这种结构使得环糊精比相同的葡萄糖结构和数量的线性多糖拥有多得多的手性识别能力，可以分离更多的对映体。

在 α-CD、β-CD、γ-CD 这 3 种天然 CD 中，α-CD 因空腔较小，γ-CD 因难于制备，价格昂贵，使其应用受到了一定的限制，而 β-CD 制备相对较容易，价格低廉；无毒，无环境污染；其空腔能与大部分客体体积相匹配得到使其得到了广泛应用，因此，本发明的研制成功具有统计学上的意义。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种以β-环糊精为键合固定相的毛细管电色谱柱的制备方法及在手性药物分离中的应用，可有效解决毛细管电色谱柱的制备及手性药物分离的问题。

本发明解决的技术方案是，以β-环糊精为起始反应物，采用分步合成法，依次合成六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精、六位单取代的氨化-β-环糊精、硅烷化硅胶以及β-环糊精键合硅胶手性固定相，将β-环糊精键合硅胶手性固定相装填至毛细管柱中，制备成毛细管填充柱，其步骤包括有：①.六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精的制备，②.六位单取代的氨化-β-环糊精的制备，③.硅烷化硅胶的制备，④.β-环糊精键合硅胶手性固定相的制备，⑤.毛细管填充柱的制备。

本发明β-环糊精键合硅胶固定相的制备相对较容易，价格低廉，低毒，环境污染低，此外，采用分步合成法能有效的控制产物的结构和纯度，β-CD的空腔与大部分客体体积相匹配，是β-环糊精为键合固定相的毛细管电色谱柱的制备方法及在手性分离中的应用上的创新。

附图说明

图1为本发明盐酸舍曲林在CEC模式下的拆分色谱图。

图2为本发明盐酸克伦特罗在CEC模式下的拆分色谱图。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

本发明的具体制备过程如下：

①.六位单取代的对甲苯磺酰-β-环糊精（β-CD-6-OTs）的制备：

    a. β-环糊精重结晶，室温18-25 ℃下，β-环糊精( β-CD )在水中的溶解度为18.8 mg/g，在80℃为196.6 mg/g，β-环糊精与纯水按质量比1:5进行重结晶，在500ml烧杯中加入200 ml蒸馏水，加热至微沸，称取40gβ-环糊精，搅拌加入至溶解，趁热快速抽滤，滤液于冰箱中放置12h，β-环糊精结晶析出，抽滤，得重结晶后的β-环糊精，按上述步骤将β-环糊精重结晶3次，将所得经3次重结晶的β-环糊精置于真空干燥箱中80℃干燥12h，备用；

    b. 对甲苯磺酰氯重结晶及其乙腈溶液的制备，称取对甲苯磺酰氯10g，加入30 ml石油醚，置于加热套中加热至60～90℃使之溶解，放置室温18-25℃，并于4 ℃冷藏12 h，抽滤，得重结晶的对甲苯磺酰氯，按上述步骤重结晶3次，再置真空干燥箱中25 ℃干燥4h，得3次重结晶的对甲苯磺酰氯，称取5.04g 3次重结晶的对甲苯磺酰氯溶于15ml乙腈中，成对甲苯磺酰氯乙腈溶液，备用；