[发明专利]培育标记中枢神经系统少突胶质细胞的转基因斑马鱼的方法及其应用有效
| 申请号： | 201210452397.9 | 申请日： | 2012-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN103805601A | 公开（公告）日： | 2014-05-21 |
| 发明（设计）人： | 殷梧;胡兵 | 申请（专利权）人： | 中国科学技术大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/63;C12N5/10;A01K67/033;A61K49/00 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 王旭 |
| 地址： | 230026 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培育 标记 中枢神经系统 胶质 细胞 转基因 斑马 方法 及其 应用 | ||
1.斑马鱼lingo-1基因启动子，其核苷酸序列为SEQ ID No：1。
2.一种包含斑马鱼lingo-1基因启动子、荧光蛋白编码框和poly A片段的重组载体。
3.根据权利要求2所述的重组载体，其中所述重组载体的核苷酸序列为SEQ ID No：2，其中所述荧光蛋白为EGFP，所述poly A片段为SV40polyA片段。
4.一种包含权利要求2或3所述的重组载体的宿主细胞。
5.一种培育lingo-1转基因斑马鱼的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)构建lingo-1重组表达载体，所述lingo-1重组表达载体包含适当的核酸内切酶酶切位点，斑马鱼lingo-1基因启动子序列，荧光蛋白编码框和poly A片段；
(2)用步骤(1)中的重组表达载体转化斑马鱼受精卵，得到F0代；和
(3)将F0代与野生型的斑马鱼杂交，得到lingo-1特异性基因标记的转基因斑马鱼。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述步骤(1)中所用的核酸内切酶酶切位点为I-SceI限制酶酶切位点或Tol2转座酶酶切位点；所述荧光蛋白选自EGFP、mCherry、RFP、YFP或DsRED；所述poly A片段选自SV40 polyA片段或BGH poly A片段。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，将斑马鱼lingo-1基因启动子序列、荧光蛋白编码框和poly A片段插入到载体pI-SceI-pBSII-SK+中，得到所述lingo-1重组表达载体。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述lingo-1重组表达载体通过显微注射法、原生质体融合法或高压电穿孔法导入斑马鱼受精卵，得到F0代。
9.一种影响少突胶质细胞分化成熟的药物或化合物筛选模型，所述筛选模型包括野生型斑马鱼与利用权利要求5的方法构建的lingo-1:荧光蛋白品系杂交得到的杂合斑马鱼幼鱼。
10.一种影响少突胶质细胞再髓鞘化的药物或化合物筛选模型，所述筛选模型包括野生型斑马鱼与利用权利要求5的方法构建的lingo-1:荧光蛋白品系杂交得到的杂合斑马鱼成鱼。
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