[发明专利]斑马鱼用于测试安全物质的安全性的用途和方法

权利要求书

1.一种斑马鱼用于测试安全物质的安全性的方法，其特征在于包含如下步骤：

配制胚胎培养液，然后向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性，其中胚胎培养液用pH为6.7-8.5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有5mM NaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl ₂和0.33mM MgSO₄。

2.根据权利要求1所述的方法，其中斑马鱼胚胎通过如下方法选择：

采卵前一天将性成熟的斑马鱼，按雌∶雄为1∶2的比例放入配缸内并隔开，次日上午9:00自然交配并收集受精卵，用胚胎培养液清洗两次收集得到的受精卵，并去除杂质和坏卵，之后后置于胚胎培养液中，29.3℃进行控光培养；当2hpf时，在显微镜下挑选来自同一亲本、正常发育比率达85％以上且发育时期一致的斑马鱼胚胎。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中培养斑马鱼胚胎的方法如下：将斑马鱼胚胎用胚胎培养液清洗两次，然后移入24孔板的样孔中，每孔20枚，每孔滴加加入了待测安全物质的胚胎培养液，每孔4ml，随后加盖封闭，置于培养箱中，在29.3℃培养斑马鱼胚胎。

4.根据权利要求1所述的方法，其中观察记录的时间是培养后第4、12、24、48、72小时，记录畸形率和死亡率。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中pH为7.0-7.8。

6.根据权利要求5所述的方法，其中pH为7.2。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中所述的待测安全物质为谷氨酸钠、三聚氰胺、酒石黄、苯甲酸钠或亚硝酸钠。

8.一种斑马鱼用于测试待测安全物质毒性的用途，其特征在于：向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性，其中胚胎培养液用pH为6.7-8.5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有5mM NaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl₂和0.33mM MgSO₄。