[发明专利]斑马鱼用于测试安全物质的安全性的用途和方法

说明书

技术领域

本发明涉及毒性检测领域，具体涉及一种斑斑马鱼用于测试安全物质的安全性的用途和方法。

背景技术

随着自然生产方式的减少，工业化比重逐渐增加，食品原料在生产、贮存、运输、加工等过程中自觉或不自觉地会引入一些化学物质，这给食品安全带来越来越多的不安全因素。

化学物质在食品中的使用历史悠久，在现代食品的生产、加工、贮运和食用等过程中都有化学物质相伴，也正是这些化学物质在食品中的广泛使用，才使得食品工业成为朝阳产业。但是化学物质的使用也给食品的安全性带来了不可忽视的影响，其中包括药物残留、重金属、食品中的天然毒物质、食品加工、包装、储存对食品安全性的影响。

尤其是食品添加剂，为了达到食品满足某些方面的指标，加入了对生物体以及人体安全无法明确定性的物质，这些物质如果在生物体中测试，则测试周期会比较长，加上人体对不安全物质的耐受程度，短期内无法看出某种食品添加剂是否对人体具有隐形的危害。

本发明通过实验发现，斑马鱼能够对未知安全的物质给出相对准确的安全预期。特别是，本发明通过使用特殊的胚胎培养液培养斑马鱼，在培养液中加入待测安全物质后，能够使胚胎对待测安全物质的不良反应在较短的时间内表现出来，大大缩短了检测周期。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种斑马鱼用于测试安全物质的安全性的用途和方法。具体地，本发明提供了一种斑马鱼用于测试安全物质的安全性的方法，其特征在于该方法包含如下步骤：

配制胚胎培养液，然后向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性。其中胚胎培养液用pH为6.7-8.5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有5mM NaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl₂和0.33mM MgSO₄。

上述方法中，斑马鱼胚胎通过如下方法选择：

采卵前一天将性成熟的斑马鱼，按雌∶雄为1∶2的比例放入配缸内并隔开，次日上午9:00自然交配并收集受精卵，用胚胎培养液清洗两次收集得到的受精卵，并去除杂质和坏卵，之后后置于胚胎培养液中，29.3℃进行控光培养；当2hpf时，在显微镜下挑选来自同一亲本、正常发育比率达85％以上且发育时期一致的斑马鱼胚胎。

上述方法中，培养斑马鱼胚胎的方法如下：将斑马鱼胚胎用胚胎培养液清洗两次，然后移入24孔板的样孔中，每孔20枚，每孔滴加加入了待测安全物质的胚胎培养液，每孔4ml，随后加盖封闭，置于培养箱中，在29.3℃培养斑马鱼胚胎。

上述方法中，观察记录的时间是培养后第4、12、24、48、72小时，记录畸形率和死亡率。

上述方法中，pH为7.0-7.8，优选地，pH为7.2。

畸形是指斑马鱼体型与正常的相同培养时间单用胚胎培养液培养的斑马鱼体型有差异。

死亡是指用搅拌棒触碰斑马鱼尾部时斑马鱼没有任何反应。

上述方法中，所述的待测安全物质为需要验证其对生物安全性的任何物质，包括有机物或无机物，无论安全物质在水中的溶解度如何，都可以作为本发明的上述方法测量的待测安全物质。对于水中溶解度高的物质，直接将其按照浓度梯度溶解于胚胎培养液中，对于水中溶解度低的固体物质，将其粉碎到500-1000目后加入到胚胎培养液中高速搅拌制成悬浮液。对于水中溶解度低的液体物质，将加入到胚胎培养液中高速搅拌制成悬乳液。优选地，安全物质包括认为对人体有毒的物质和一般认为对生物无毒却可能有毒的安全物质。尤其优选地，安全物质例如为谷氨酸钠、三聚氰胺、酒石黄、苯甲酸钠、亚硝酸钠等食品添加剂。

本发明还提供了斑马鱼用于测试待测安全物质毒性的用途，其特征在于：向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性。其中胚胎培养液用pH为6.7-8.5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有5mM NaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl₂和0.33mMMgSO₄。