[发明专利]一种在酵母中重组表达生产人胸腺肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及一种利用酵母重组表达生产人胸腺肽的方法。

背景技术

多肽对人体具有非常重要的不可替代的调节作用，这种作用几乎涉及到人体的所有生理活动。对人体的免疫系统来说，多肽尤其是胸腺肽或胸腺素（Thymosins）显得更加重要和直接。胸腺肽是一种应用较早的免疫药物(Goldstein AL.2007.History of the discovery of the thymosins.Ann N YAcad Sci.1112:1-13)。胸腺肽是由胸腺上皮细胞所分泌，含有40多种组分的一类多肽激素混合物,由Goldstein等于1966年首次从胎牛胸腺蛋白提取液中发现，其水平与机体的免疫功能密切相关。根据这些多肽在等电聚焦电泳分析图谱上的位置，可以划分为三型。其中：pI＜5的为α；5＜pI＜7的为β；pI＞7的为γ（Goldstein AL,Slater FD,White A.1966.Preparation,assay,and partialpurification of a thymiclymphotopoietic factor(thymosin).Proc Nat AcadSci USA.56:1010-1017）。

在β型胸腺肽中，目前已经有20多种异构体被鉴定出来，而人体内主要存在三种：胸腺肽β4，β10和β15。由于近年来发现胸腺肽β家族成员的功能不仅仅局限于与肌动蛋白结合，影响细胞的生长和迁移，而且在其他多方面均有作用。同时，胸腺肽β家族新的功能也为一些疾病的诊断和治疗提供了新的研究思路，从而越来越多地引起众多研究者的注意（Goldstein AL,Hannappel E,Sosne G,Kleinman HK.2012.Thymosin β4:a multi-functional regenerative peptide.Basic properties and clinical applications.Expert Opin Biol Ther.12:37-51)。尤其是胸腺肽β4(Tβ4)在胸腺肽β家族中丰度最高,广泛分布于各组织、器官和细胞中。已有大量实验结果证明Tβ4与免疫功能、神经发育和肌动蛋白功能密切(Hannappel E.Beta-Thymosins.2007.Ann N Y Acad Sci.1112:21-37)。Tβ4还具促进血管生成（Smart N,Rossdeutsch A,Riley P.2007.Thymosin beta 4 and angiogenesis:Modes of action and therapeuticpotential.Angiogenesis.10:229-241;Freeman KW,Bowman BR,ZetterBR.2011.Regenerative protein thymosin beta-4 is a novel regulator ofpurinergic signaling.FASEB J.25:907-15）、修复受损的心肌（Ehrlich HP,Hazard SW 3rd.2010.Thymosin beta4 enhances repair by organizingconnective tissue and preventing the appearance of myofibroblasts.Ann NY Acad Sci.1194:118-24;Smart N,Dubé KN,Riley PR.2010.Identificationof Thymosin β4 as an effector of Hand1-mediated vascular development.NatCommun.1:46;Dubé KN,Bollini S,Smart N,Riley PR.2012.Thymosin β4protein therapy for cardiac repair.Curr Pharm Des.18:799-806;Gajzer DC,Balbin J,Chaudhry HW.2012.Thymosin β4 and cardiac regeneration:arewe missing a beat? Stem Cell Rev.2012 May 25.DOI:10.1007/s12015-012-9378-3）、创伤愈合（Malinda KM et al.1999.Thymosinbeta 4 accelerates wound healing.J Invest Dermatol.113:364-368;Bock-Marquette I,Saxena A,White MD,Dimaio JM,Srivastava D.2004.Thymosin β4 activates integrin-linked kinase and promotes cardiac cellmigration,survival and cardiac repair.Nature.432(7016):466-472;PhilpD,Kleinman HK.2010.Animal studies with thymosin beta,a multifunctionaltissue repair and regeneration peptide.Ann N Y Acad Sci.1194:81-86)、激活毛囊干细胞引起毛发生长(Philp D.et al.2004.Thymosin beta 4increases hair growth by activation of hair follicle stem cells.FASEBJ.18:385-387;Philp D,St-Surin S,Cha HJ,Moon HS,Kleinman HK,ElkinM.2007.Thymosin beta 4 induces hair growth via stem cell migration anddifferentiation.Ann N Y Acad Sci.1112:95-103)、细胞保护功能（Kumar S,Gupta S.2011.Thymosin beta 4 prevents oxidative stress by targetingantioxidant and anti-apoptotic genes in cardiac fibroblasts.PLoS One.6(10):e26912）、修复受损角膜（Sosne G,Qiu P,Kurpakus-Wheater M,MatthewH.2010.Thymosin beta4 and corneal wound healing:visions of thefuture.Ann N Y Acad Sci.1194:190-8）、修复脑损伤（Morris DC,Chopp M,Zhang L,Lu M,Zhang ZG.2010.Thymosin beta4 improves functionalneurological outcome in a rat model of embolic stroke.Neuroscience.169:674-82）、促进牙的发育(Choi BD,Yun SH,Jeong SJ,Wang G,Kim HJ,LimDS,Jeong MJ.2012.Expression of thymosin β4 in odontoblasts duringmouse tooth development.Int J Mol Med.29:841-7)甚至抗肿瘤功能（CaersJ.et al.2010.Thymosin β4 has tumor suppressive effects and itsdecreased expression results in poor prognosis and decreased survival inmultiple myeloma.Haematologica.95:163-167）。