[发明专利]微波消解-ICP-MS法直接测定海产品中有机硒、蛋白硒或多糖硒的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及海产品中硒形态分析的检测方法，尤其涉及一种使用微波消解-电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法直接测定海产品中有机硒、蛋白硒或多糖硒的检测方法。 

背景技术

微量元素硒是生物体必需的营养元素,但过量的硒却又能引起中毒，因此，硒是具有有益和有毒双重性质的元素，摄入过多或摄入不足都会造成肌体损伤，引起各种疾病。由于硒的有益性和致毒性之间的浓度界限很窄，硒的日推荐摄入量被限制在50-200μg/d。此外，硒的二重性与它存在的形态及其含量有关。 

硒的存在形态主要分为无机硒和有机硒，硒的功能性取决于其所存在的化学形态。在自然环境中硒主要以无机形态存在，常见的有亚硒酸钠和硒酸钠，较低水平就有很高的毒性，而且吸收率低，只有极少部分被机体吸收，大部分都随尿液排出，生物利用率低。在生物体内硒主要以有机形态存在，主要包括蛋白硒、多糖硒等生物大分子。相对于无机硒的毒性和致突变作用，有机硒毒性低、副作用小、消化率和生物学利用率高，其生物医学功能大于无机硒，如蛋白硒具有保护细胞免受脂质过氧化、清除自由基、调控激素等重要生理功能，多糖硒具有提高免疫、抗氧化、抗金属中毒、抗癌细胞和病毒的作用。可见不同形态的硒对生物体的作用不同，硒化合物的不同生理、生物活性及其迁移转化规律，不仅取决于硒的总浓度水平，而且与硒存在的化学形态以及不同化学形态下硒化物的浓度水平直接相关。我国是一个既有丰富硒资源，又存在大面积硒缺乏地区的国家，而海产品是人们获得硒的一个重要饮食来源。 

目前，国内外有关海产品中硒的赋存形态分析的研究鲜有报道。国内外有关微波消解-ICP-MS法直接测定海产品中有机硒、蛋白硒和多糖硒的检测方法尚未见文献报道。因此，开展海产品中有机硒、蛋白硒和多糖硒的检测方法研究，进一步探明硒在海产品中的赋存形态和含量分布，对海产品安全以及提高对海产品营养价值的认识，对促进海产品的开发利用和发展及进出口贸易，对指导人们合理补硒都具有重要意义。 

发明内容

为了解决海产品中硒形态分析检测的难题，本发明的目的是提供一种利用微波消解-电感耦合等离子体质谱法直接测定海产品中有机硒、蛋白硒或多糖硒的检测方法，该方法具有灵敏、准确、快速、简便的特点。 

为了实现上述目的，本发明采用了以下的技术方案： 

微波消解-ICP-MS法直接测定海产品中有机硒、蛋白硒或多糖硒的检测方法，该方法包括以下的步骤：

一、样品的制备

将样品去壳，所有可食部分用打浆机充分搅碎和混匀，装入样品袋，在-18℃贮存备用；

（一）有机硒的分离纯化

采用持续透析法，准确称取20.0g试料装入透析袋中，在超纯水中透析96h，每隔12h换一次水；透析完成后的试料经真空冷冻干燥，在-18℃贮存备用；

（二）硒蛋白的分离纯化

1）准确称取20.0g试料至烧杯中，加入120mL丙酮，放在磁力搅拌器上搅拌脱脂4h，8500r/min离心15min，弃上清液；

2）挥干丙酮后，加入600mL 0.25mol/L NaOH溶液，50℃水浴搅拌提取4h，过滤，得到上清液；

3）滤渣加入200mL 0.25mol/L NaOH溶液反复提取2次，合并滤液，加入硫酸铵至饱和度为95%，4℃静置12h；

4）8000r/min离心25min，沉淀以50mL50mmol/L 三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液，pH8.0，溶解；

5）4℃下依次用50mmol/L 三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液、超纯水透析至BaCl₂溶液检测透析液中无SO₄^2-析出；

6）透析完成后的试料经真空冷冻干燥，在-18℃贮存，用于硒含量分析；

（三)硒多糖的分离纯化

1）粗多糖提取：准确称取20.0g试料至烧杯中，脱脂后，加入500mL去离子水，70℃水浴浸提5h，8500r/min离心15min，收集上清液；加入3倍体积95%乙醇，4℃静置过夜，离心收集沉淀；沉淀用去离子水复溶，冷冻干燥得到粗多糖；