[发明专利]β-糖苷酶突变体及其编码基因与其在生产人参皂苷CK中的应用

权利要求书

1.一种蛋白，是如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有β-糖苷酶活性由序列4衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述蛋白的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因是如下(1）或(2）或(3）的DNA分子：

(1）序列表中序列3所示的DNA分子；

(2）在严格条件下与（1）限定的DNA序列杂交且编码具有β-糖苷酶活性蛋白的DNA分子；

(3）与（1）限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且编码具有β-糖苷酶活性蛋白的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于：

所述重组载体为将权利要求1所述蛋白的编码基因插入表达载体中，得到表达权利要求1所述蛋白的重组载体。

6.权利要求1所述蛋白在作为β-糖苷酶中的应用。

7.权利要求1所述蛋白、权利要求2或3所述基因或权利要求4所述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在生产人参皂苷CK中的应用。

8.一种生产人参皂苷CK的方法，包括如下步骤：

1）发酵权利要求4所述重组菌，收集发酵液、离心收集菌体、破碎菌体后离心收集上清液；

2）将所述上清液与人参皂苷底物Rb₁在MC缓冲液中反应，得到人参皂苷CK。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

1）所述发酵在IPTG诱导下进行；

2）所述MC缓冲液为pH值为5.5的MC缓冲液；所述pH值为5.5的MC缓冲液具体由终浓度为200mM磷酸氢二钠、终浓度为100mM柠檬酸和水组成。