[发明专利]一种从含巴卡亭Ⅲ的浸膏分离和提纯巴卡亭Ⅲ的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分离纯化巴卡亭Ⅲ的技术领域，具体涉及一种从含巴卡亭Ⅲ的浸膏分离和提纯巴卡亭Ⅲ的方法。

背景技术

紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物,也是目前所了解的惟一一种可以促进微管聚合和稳定已聚合微管的药物。同位素示踪表明，紫杉醇只结合到聚合的微管上，不与未聚合的微管蛋白二聚体反应。细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能，特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常分裂。通过Ⅱ-Ⅲ临床研究，紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。

巴卡亭Ⅲ可以通过化学方法转化为紫杉醇，所以制备巴卡亭Ⅲ是有重大的意义。

发明内容

现有技术中如果想得到高纯度巴卡亭Ⅲ，必然巴卡亭Ⅲ收率会降低。实际生产中纯度和收率是一对矛盾。本发明提供了一种既能保证高纯度又能保证高收率的分离和提纯巴卡亭Ⅲ的方法。

本发明提供了一种从含巴卡亭Ⅲ的浸膏分离和提纯巴卡亭Ⅲ的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)用乙醇水溶液溶解含巴卡亭Ⅲ的浸膏；

(2)用有机溶剂萃取步骤(1)溶解巴卡亭Ⅲ的溶液；

(3)干燥萃取相，得到含巴卡亭Ⅲ的固体粉末Ⅰ；

(4)用正相色谱纯化固体粉末Ⅰ，收集含巴卡亭Ⅲ的馏分；

(5)干燥步骤(4)得到的含巴卡亭Ⅲ的馏分，得到含巴卡亭Ⅲ的固体粉末Ⅱ；

(6)结晶固体粉末Ⅱ；

(7)干燥步骤(6)得到的晶体，得到含巴卡亭Ⅲ的固体粉末Ⅲ；

(8)用反相色谱纯化固体粉末Ⅲ，收集含巴卡亭Ⅲ的馏分；

(9)干燥步骤(8)得到的含巴卡亭Ⅲ的馏分，得到含巴卡亭Ⅲ的固体粉末Ⅳ；

(10)结晶固体粉末Ⅳ；

(11)干燥步骤(10)得到的晶体，得到高纯度巴卡亭Ⅲ。

所述方法步骤(1)中浸膏优选为含有紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ、巴卡亭Ⅲ、三尖衫宁碱和13-乙酰基-9-羟基巴卡亭Ⅲ。

所述方法步骤(1)中乙醇水溶液的酒精度优选为40～60，用该酒精度乙醇水溶液溶解浸膏，优点是在步骤(2)中萃取时易分层。

所述方法步骤(2)中有机溶剂优选为二氯甲烷或乙酸乙酯，萃取温度20～25℃，等体积萃取三次，合并萃取相，萃余相HPLC检测不含紫杉烷类化合物时废弃。

所述方法步骤(3)优选为将萃取相先用减压蒸馏方法，后用真空干燥方法得到固体粉末Ⅰ，回收的有机溶剂可以做下次萃取时重复利用。

所述方法步骤(4)中正相色谱条件优选为：固定相是硅胶，流动相是二氯甲烷和无水乙醇，体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/1～5，上样量是每100g的硅胶单次纯化1～20g的固体粉末Ⅰ。

所述方法步骤(4)中正相色谱条件最优选为：固定相是200～300目的非球型硅胶，流动相是二氯甲烷和无水乙醇，体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/2，上样量是每100g的硅胶单次纯化10g的固体粉末Ⅰ，收集含巴卡亭Ⅲ的馏分，硅胶使用后用体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/20再生，洗脱至紫外检测没有杂质。

所述方法步骤(5)优选为将含巴卡亭Ⅲ的馏分先用减压蒸馏方法，后用真空干燥方法得到固体粉末Ⅱ，回收的流动相用GC检测后，配成体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/2的流动相可以做下次层析时重复利用。

所述方法步骤(6)优选为用甲醇-水结晶。

所述方法步骤(7)优选为用真空干燥方法得到含巴卡亭Ⅲ的固体粉末Ⅲ。

所述方法步骤(8)中反相色谱条件优选为：固定相是C₁₈，流动相是乙腈和超纯水，体积比是乙腈/超纯水=100/80～120，上样量是每100g的C₁₈单次纯化1～10g的固体粉末Ⅲ。

所述方法步骤(8)中反相色谱条件最优选为：固定相是5μm的C₁₈，流动相是乙腈和超纯水，体积比是乙腈/超纯水=100/100，上样量是每100g的C₁₈单次纯化2g的固体粉末Ⅲ，收集含巴卡亭Ⅲ的馏分，C₁₈使用后用体积比是乙腈/超纯水=100/10再生，洗脱至紫外检测没有杂质。