[发明专利]一种抗小麦黄花叶病毒转基因小麦代谢物检测方法有效

专利信息
申请号: 201210460498.0 申请日: 2012-11-15
公开(公告)号: CN103808818A 公开(公告)日: 2014-05-21
发明(设计)人: 付伟;王玲;贺艳;朱振营 申请(专利权)人: 中国检验检疫科学研究院
主分类号: G01N30/02 分类号: G01N30/02;G01N30/06
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人: 王朋飞;张庆敏
地址: 100029 北京市朝*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 小麦 花叶 病毒 转基因 代谢物 检测 方法
【权利要求书】:

1.一种抗小麦黄花叶病毒代谢物检测方法,包括以下步骤:

1)将抗小麦黄花叶病毒转基因小麦的种子脱壳,磨成粉状,加入提取溶液于4℃浸提;

2)离心后干燥,加入内标物;

3)干燥,加入衍生试剂;

4)采用气相色谱-质谱联用的方法对衍生后的样品进行分析;

其特征在于,步骤1)中所述提取溶液为体积比为2:3:3的水、乙腈和异丙醇的混合液。

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,

步骤4)中色谱条件为:柱箱程序:60℃保持1min,然后每分钟10℃升温至325℃,保持10min,1min后运行;前进样器:10μl;进样量:1μl;载气:He,99.999%;压力:10.473psi;色谱柱:DB-5ms:1611.66442;DB-5ms325℃:30m×0.25mm×0.25μm;

步骤4)中质谱条件为:EI能量:70eV;离子源温度:230℃;四级杆温度:150℃;溶剂延迟:7min。

3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤1)中为向100mg粉末中加入1mL提取溶液于4℃浸提。

4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,步骤1)中浸提时间为20min。

5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤2)中所述离心是指在4℃,12200g/min,离心2min。

6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤2)中使用的内标物为十四酸。

7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤3)中所述衍生试剂的制备方法为:将10μl盐酸甲氧胺溶于40mg/ml吡啶中,30℃,1500g,振荡90min,然后加入N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺和1%三甲基氯硅烷90μl,37℃,振荡30min,即得。

8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,步骤3)中衍生时间为30min或90min。

9.一种用于抗小麦黄花叶病毒转基因小麦代谢物GC-MS检测的提取试剂,其特征在于,所述提取试剂为体积比为2:3:3的水、乙腈和异丙醇的混合液。

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