[发明专利]一种深层液体发酵法制备富硒金耳粗多糖粉的方法

权利要求书

1.一种深层液体发酵法制备富硒金耳粗多糖粉的方法，其特征是将金耳固体斜面菌种活化后接入摇瓶种子培养基中培养，分散菌丝体，将培养好的种子液接入摇瓶发酵液体培养基培养。在发酵液体培养基中加入一定浓度无机硒，使金耳菌丝体中积累高浓度的有机硒，同时发酵液有效成分中也有一定浓度的硒元素。发酵结束后，收集菌丝体，匀浆，热水浸提，浸提液浓缩后醇析，冷冻干燥得到富硒金耳胞内粗多糖粉；另外将发酵液浓缩，将浓缩液醇析后冷冻干燥得到富硒金耳胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒金耳粗多糖粉； 

具体步骤为： 

(1)菌种培养 

出发菌种为本实验室金耳斜面保藏菌种； 

①摇瓶种子培养 

摇瓶种子培养基：PDA1L加磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0； 

培养方法：从斜面菌种中取3～4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基100mL于25℃，120r/min，振荡培养7d； 

②摇瓶发酵培养 

发酵培养基：葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氢钾0.2g/100mL、硫酸镁0.05g/100mL、亚硒酸钠若干； 

培养方法：将培养好的种子以15％的接种量接入摇瓶发酵培养基中25℃，120r/min，振荡培养7d； 

(2)富硒粗多糖的提取：离心分离收集发酵液和菌丝体； 

①胞内粗多糖的提取：将湿菌丝体匀浆，80℃热水浸提，加水量为5倍体积湿菌丝体，总提取时间为12h，提取2次，合并提取液，浓缩后加入4倍体积95％乙醇在4℃醇析12h，8000rpm离心得沉淀物，沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥，粉碎后得到富硒金耳胞内粗多糖粉； 

②胞外粗多糖提取：将发酵液浓缩后调PH值为5.5，添加4倍体积发酵液的95％乙醇，4℃醇析17h，8000rpm离心得沉淀物，沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥，粉碎后得到富硒金耳胞外粗多糖粉； 

(3)产品的获得：将富硒金耳胞内粗多糖粉与茶树菇胞外粗多糖粉合并，得到富硒金耳粗多糖粉。 

2.如权利要求1所述的在发酵液体培养基中加入一定浓度无机硒，其特征在于加入的为亚硒酸钠，其含量为40μg-60μg.。 

3.如权利要求1所述的分散菌丝体，其特征在于摇瓶种子培养基中预先装有经过高压蒸汽灭菌的玻璃珠。