[发明专利]从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法

权利要求书

1.一种从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于它包括以下步骤：(a)哺乳动物血液的采集；(b)溶血；(c)铜盐存在下的热变性；(d)超滤浓缩；(e)丙酮沉淀并采用旋转蒸发仪回收丙酮；(f)柱层析；(g)冷冻干燥。

2.如权利要求1所述的从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的哺乳动物血液的采集为：在肉联厂屠宰轨道的放血位置上放置接血槽，在接血过程中同时加入抗凝剂并不断搅拌，抗凝剂为接血体积比的1/8～1/6，抗凝剂为3.8％的食品级柠檬酸钠。

3.如权利要求1所述的从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的溶血为：将所得血细胞加入3～4倍量的去离子水，搅拌溶血至少30分钟，备用。

4.如权利要求1所述的从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的铜盐存在下的热变性：(1)、将收集的每100升红细胞中添加100升的蒸馏水、3.8～4升的氯化钠和38～40毫升的氯化铜搅匀，水浴加热到68～70℃恒温20～30分钟，将反应液泵入冷却罐，用搅拌机搅拌，迅速冷却至室温，至少再搅拌2小时，铜离子与蛋白质结合成变性血红蛋白而沉淀，用甩干机甩干过滤去变性血红蛋白沉淀，得滤液1；(2)、将滤液1在68～70℃恒温水浴下，向滤液1中慢慢加入38～40毫升的氯化铜，至滤液清澈变为淡蓝色为止，保温至少20分钟，将反应液泵入冷却罐，用搅拌机搅拌，迅速冷却至室温，搅拌至少2小时，用甩干机甩干过滤去除铜离子与蛋白质结合成的变性血红蛋白，得滤液2。

5.如权利要求1所述的从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的超滤浓缩为：将滤液2经布氏漏斗抽滤去除细微颗粒，经中空纤维超滤器超滤浓缩至总体积的体积比1/20～1/25，收集浓缩液，中空纤维超滤器的截留分子量选为10千道尔顿。

6.如权利要求1所述的从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的丙酮沉淀并采用旋转蒸发仪回收丙酮为：在浓缩液中，不断搅拌下缓慢加入预冷后的0.73～0.75倍全体积的工业丙酮，3～4℃放置至少1小时，产生大量絮状沉淀，采用碟式分离机以3000～3500转/分冷冻离心约30分钟，沉淀留用；将上清液回收再次不断搅拌下缓慢加入预冷后体积比的0.73～0.75全体积的工业丙酮，3～4℃放置至少1小时，3000～3500转/分冷冻离心20～30分钟。将两次沉淀合并，加入体积比2～3％的去离子水，充分搅匀，装入透析袋透析至少12小时，采用碟式分离机以3000～3500转/分冷冻离心大约30分钟，离心除去不溶性蛋白，并采用旋转蒸发仪回收丙酮，得透析液。

7.如权利要求1所述的从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的柱层析为：空纤维离子交换柱预先用体积比为2.5毫摩尔/升的磷酸钾缓冲液平衡，其PH值为7.5～8.0；透析液上在层析柱上，完毕后用同一缓冲液洗脱至280纳米值低于0.02，然后用体积比为2.5～200毫摩尔/升的pH7.5～8.0磷酸缓冲液进行梯度洗脱，用部分收集器收集。

8.如权利要求1所述的从哺乳动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的冷冻干燥为：收集液经去离子水透析至少12小时，冷冻干燥，得成品。