[发明专利]引发单核树突细胞和T细胞TH-1应答的组合物和方法

说明书

本发明提供了诱导未成熟树突细胞(DC)成熟以及致敏这些细胞以诱导1型免疫应答的组合物和方法。本发明还提供了可用于激活及用于制备朝产生1型细胞因子和/或1型应答极化的T细胞的树突细胞群。同样地，提供了激活的、极化的T细胞群以及制备它们的方法。

本申请是申请日为2002年9月6日、申请号为02819817.4、发明名称为“引发单核树突细胞和T细胞TH-1应答的组合物和方法”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

抗原呈递细胞（APC)在引发有效的免疫应答方面很重要。它们不仅将抗原呈递给具有抗原特异性T细胞受体的T细胞，而且提供T细胞激活所必需的信号。这些信号仍未完全解释清楚，但包括许多细胞表面分子以及细胞因子或生长因子。原初或未极化T细胞激活所必需的因子可能与记忆T细胞再激活所必需的因子有所不同。APC呈递抗原和递送T细胞激活信号的能力通常被描述为辅佐细胞功能。虽然单核细胞和B细胞已被证明是感受态（competent）的APC，但它们在体外的抗原呈递能力似乎局限于先前致敏T细胞的再激活。因此，它们不能够在功能上直接地激活原初或未致敏T细胞群。

树突细胞(DC)是被认为能够激活原初和记忆T细胞的免疫系统中的专职抗原呈递细胞。越来越多的离体制备树突细胞用于免疫治疗，特别是癌症的免疫治疗。制备具有最佳免疫刺激性质的树突细胞需要理解并运用这些细胞离体培养的生物学。培养这些细胞的多种方案已有描述，并附有各方案的多种优点。近来的方案包括无血清培养基的利用，以及赋予培养细胞预定的免疫刺激性质的成熟条件的使用。

树突细胞的成熟是将表型上与皮肤朗格汉斯细胞(Langerhans cell)相似的未成熟DC转化为成熟的、能够迁移到淋巴结的抗原呈递细胞的过程。这个过程导致未成熟树突细胞所特有的强抗原摄取能力的丧失，以及共刺激细胞表面分子和多种细胞因子表达的上调。已知的成熟方案是以据信DC在暴露于抗原期间或之后所遇到的体内环境为基础的。这个方法最好的例子是使用单核细胞条件性培养基(MCM)作为细胞培养基。MCM通过培养单核细胞体外产生，并用作为成熟因子的来源。MCM中参与成熟的主要成分据报道是（原）炎症细胞因子白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）以及肿瘤坏死因子α(TNFx)。其它成熟因子包括前列腺素E2(PGE2)、多聚-dIdC、血管活性肠肽(VIP)、细菌脂多糖(LPS)以及分枝杆菌或分枝杆菌成分，例如特定胞壁组份。

完全成熟的树突细胞在质量上和数量上都不同于未成熟DC。完全成熟的DC表达较高水平的MHC I类和II类抗原，以及T细胞共刺激分子，即CD80和CD86。这些变化增强了树突细胞激活T细胞的能力，因为它们通过T细胞共刺激分子对应物，例如象CD28，增加了细胞表面的抗原密度以及T细胞激活信号的数量级。此外，成熟DC产生大量细胞因子，其刺激并指导T细胞应答。其中的两个细胞因子是白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素12(IL-12)。这些细胞因子对诱导的T细胞应答方向具有相反的影响。IL-10产物导致诱导Th-2型应答，而IL-12产物导致Th-1型应答。后一种应答在期望细胞免疫应答的情况下，例如，举例来说，在癌症免疫疗法中尤为需要。Th-1型应答导致细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的诱导和分化，它们是细胞免疫系统的效应臂（effector arm）。该效应臂在抵抗肿瘤生长方面最为有效。IL-12也诱导天然杀伤(NK)细胞的生长，并具有抗血管生成活性，这两者都是有效的抗肿瘤武器。因此，利用产生IL-12的树突细胞在理论上最适用于免疫刺激。

某些树突细胞成熟因子，例如，举例来说，细菌脂多糖、细菌CpGDNA、双链RNA和CD40配体据报道诱导未成熟DC产生IL-12并致敏未成熟DC产生Th-1型应答。相反，抗炎分子例如IL-10、TGF-β、PGE-2和皮质类固醇抑制IL-12产生，并致敏细胞产生Th-2型应答。