[发明专利]一种雷帕霉素/磁性羧甲基壳聚糖纳米载药微球的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物功能材料在生物医学领域中的应用，尤其涉及一种用磁性羧甲基壳聚糖固定雷帕霉素制成纳米药物微球的方法。

背景技术

雷帕霉素（RAPA），是从吸水链霉菌的发酵液中分离出来的一种新型大环内酯类免疫抑制剂。它不仅具有抗移植免疫排斥反应，而且对前列腺癌、肾癌、乳腺癌、结肠癌及肝癌等还具有较强的抑制作用。RAPA能够通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)的蛋白激酶催化活性以及磷脂酰肌3激酶(phosphoinositide—3 kinase，PI3 K)／Akt信号转导通路来调控基因表达、细胞生长和增殖，通过阻断不同的细胞因子受体信号传导，来阻断T淋巴细胞及其它细胞由G1期至S期的进程，从而发挥其免疫抑制效应。然而，临床给药发现雷帕霉素存在水溶性低(2.6ug/mL)、靶向性差及局部浓度过高等问题，同时易伴随骨髓抑制、高血脂、过度免疫抑制、腹泻、头疼等一系列的毒副反应，不利于连续化疗。因此，RAPA的临床应用受到了极大的限制。

为解决上述问题，开发新的分子靶向药物载体已成为当下学者们研究的热点，例如：S. Jhunjhunwala, G. Raimondi, A.W. Thomson, S.R. Little. Delivery of rapamycin to dendritic cells using degradable microparticles, J. Control Release[J].133 (2009) 191-197，通过单乳化蒸发法得到粒径为3.4μm的乳酸-羟基乙酸共聚物载雷帕霉素微米颗粒。此微球的平均粒径为3.4±1.65μm，药物包封率达73.95±5.43%，初步解决雷帕霉素的低水溶性和雷帕霉素的突释等问题，但是仍然存在某些不足：比如制备的雷帕霉素载药颗粒比较大，一方面阻碍了药物在血管内的流通，另一方面易导致载药微球被网状内皮组织吞噬，达不到治疗效果；载药微球靶向性差，不能准确的将药物定向输送至病变部位，仍然无法解决其对正常组织的损伤，达不到最佳治疗效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种靶向性强、载药量高、粒径较小、缓释性能好的雷帕霉素/磁性羧甲基壳聚糖纳米载药微球颗粒的制备方法，该载药微球颗粒具有超顺磁性，对肿瘤细胞具有较强的杀伤能力。

为了解决这个技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种雷帕霉素/磁性羧甲基壳聚糖纳米载药微球的制备方法，包括如下步骤（未注明的用量和比例以质量计）：

1、制备磁性Fe₃O₄纳米颗粒，备用：

（1）将七水硫酸亚铁水溶液和PEG-20000水溶液混合，不断搅拌下加一定浓度的稀氨水至pH值为9.5~10.5，溶液呈现墨绿色；

（2）逐步加入双氧水溶液，使得溶液由墨绿色变为黑色；

（3）收集溶液并转移至高压反应釜，于160℃下恒温5h；

（4）采用磁分离，收集下层沉淀；先后用蒸馏水和无水乙醇洗涤，然后采用真空干燥10~20小时，干燥完成后研磨得到磁性Fe₃O₄纳米颗粒。

2、制备磁性羧甲基壳聚糖纳米微球，备用：

（1）     将磁性Fe₃O₄纳米颗粒加到油相，搅拌分散均匀；

（2）     将配好的羧甲基壳聚糖溶液作为水相缓慢加到油相中，搅拌混合均匀，得到混合液；

（3）     向混合液中加入交联剂并继续搅拌反应一段时间；

（4）     磁分离收集下层沉淀，先后用石油醚、丙酮洗涤，干燥得到磁性羧甲基壳聚糖纳米微球；

3、制备雷帕霉素/磁性羧甲基壳聚糖纳米载药微球：

（1）将制得的磁性羧甲基壳聚糖纳米微球配成一定浓度的水分散液作为水相；雷帕霉素溶于一定体积的乙腈液作为有机相；

（2）将有机相缓慢地加入水相中，搅拌10~20小时；

（3）先用超纯水洗涤，然后用磁分离收集所得微球；重复超纯水洗涤、磁分离步骤3-5次；

（4）将所得微球经冷冻干燥后粉碎，即得到粒径为30±2nm的雷帕霉素/磁性羧甲基壳聚糖纳米载药微球。

步骤1中所述的水浴温度优选30℃；所述稀氨水浓度优选8.3%（v/v）；所述双氧水加入量优选0.27ml。