[发明专利]一种定量检测TRECs和KRECs基因的实时荧光定量PCR试剂盒以及应用

权利要求书

1.一种定量检测TRECs和KRECs基因的实时荧光定量PCR试剂盒，其中包括DNA提取液、巢式PCR反应液、包含TRECs基因插入序列的标准品I、包含KRECs基因插入序列的标准品II、包含β-actin基因插入序列的标准品III、包含TRECs基因的实时荧光引物和探针的荧光PCR反应液I、包含KRECs基因的实时荧光引物和探针的荧光PCR反应液II和包含β-actin基因的实时荧光引物和探针的荧光PCR反应液III。

2.权利要求1所述的试剂盒，其中所述的巢式PCR反应液包括：

1）巢式PCR扩增TRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQNO:1所示；

2）巢式PCR扩增TRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQNO:2所示；

3）巢式PCR扩增KRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQNO:3所示；

4）巢式PCR扩增KRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQNO:4所示；

5）巢式PCR扩增β-actin基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:5所示；

6）巢式PCR扩增β-actin基因的反向引物，其碱基序列如SEQ NO:6所示。

3.权利要求1所述的试剂盒，其中所述的荧光PCR反应液I包括：

1）实时荧光PCR检测TRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:7所示；

2）实时荧光PCR检测TRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQNO:8所示；

3）用于检测TRECs基因的探针，其碱基序列如SEQ NO:9所示；

其中所述的荧光PCR反应液II包括：

1）实时荧光PCR检测KRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQNO:10所示；

2）实时荧光PCR检测KRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQNO:11所示；

3）用于检测KRECs基因的探针，其碱基序列如SEQ NO:12所示；

其中所述的荧光PCR反应液III包括：

1）实时荧光PCR检测β-actin基因的正向引物，其碱基序列如SEQNO:13所示；

2）实时荧光PCR检测β-actin基因的反向引物，其碱基序列如SEQNO:14所示；

3）用于检测β-actin基因的探针，其碱基序列如SEQ NO:15所示。

4.权利要求1所述的试剂盒，其中所述的标准品I，其碱基序列如SEQ NO:16所示；其中所述的标准品II，其碱基序列如SEQ NO:17所示；其中所述的标准品III，其碱基序列如SEQ NO:18所示。

5.权利要求1至4所述的试剂盒，所述的特异性荧光探针为Taqman探针，标记探针5’端的为一种荧光发光基团，是FAM、VIC、TET、JOE、ROX、CY3、CY5、HEX中的一种；标记探针3’端的为一种荧光淬灭基团，是TAMRA、DABCYL、NFQ中的一种。

6.权利要求1至4所述的试剂盒，所述的Taqman探针5’端标记FAM或者VIC，3’端标记TAMRA。

7.权利要求1至6所述的试剂盒在新生儿T细胞及B细胞免疫缺陷检测中的应用。