[发明专利]糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

1）糖类抗原50校准品，浓度为0、5、10、25、50、100KU/mL，校准品稀释液为50%牛血清；

2）偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；

3）生物素标记的糖类抗原50抗体；

4）糖类抗原50抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；

5）糖类抗原50质控品；

6）化学发光液A液和B液；

7）20倍浓缩洗液；

8）反应管。

2.根据权利要求1所述的糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的发光液A液的主要成分为鲁米诺，B液的主要成分是过氧化脲。

3.根据权利要求1所述的糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2um。

4.根据权利要求1所述的糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的糖类抗原50质控品包括低值质控品和高值质控品。

5.根据权利要求1所述的糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

6.一种制备所述权利要求1的试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）糖类抗原50校准品的配制：

将CA50纯品用50%牛血清稀释成系列梯度，浓度分别为0、5、10、25、50、100KU/mL；

（2）糖类抗原50质控品的配制：

将糖类抗原50用含有50%牛血清溶液稀释配制低值质控品高值质控品，浓度范围分别为8～12KU/mL和29.6～44.4KU/mL；

（3）磁性颗粒-链霉亲和素悬浮液的制备：

取100mL0.1mol/L 2-吗啉乙磺酸溶液，依次加入10mg磁性颗粒和3mg链酶亲和素，搅拌30min，然后加入10mg/mL碳二亚胺盐酸盐溶液3.5uL，反应1h后，使用磁力架吸附，静止10min，移去液体，加入10mL0.01mol/L PBS，重复上述过程，共洗涤3次，最后用0.01mol/L PBS定溶至1L即可；

（4）生物素标记的CA50抗体的制备

取0.5mg CA50抗体，用硼酸盐缓冲液在2～8℃下透析1～3h；将透析后的抗体加入25ug生物素，同时加入二甲基亚砜，最终浓度为10%，避光反应3h，缓慢振荡；在上述溶液中加入250uL1mol/L氯化铵溶液，常温避光反应30～60min；用0.01mol/L PBS溶液在2～8℃下透析2天，期间换液3～5次；

（5）糖类抗原50抗体酶结合物的制备

采用高碘酸钠氧化法将糖类抗原50抗体与辣根过氧化物酶进行偶联后，用酶稀释液将其稀释至工作浓度1:6000，并加入5～20%酶稳定剂，储存于2~8℃；

（6）20倍浓缩洗液的配制

20浓缩洗液包括58g/L磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和1‰Proclin300；

（7）化学发光液A液和B液的配制

A液为0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris·HCl，避光保存；B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min混合；

（8）组装：将上述试剂组装成盒，储存于2~8℃；

（9）对采用该方法制的的试剂盒的进行物理检查，准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的测定值和稳定性进行测定。