[发明专利]β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

1）β-hCG校准品；

2）偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；

3）生物素标记的β-hCG抗体；

4）β-hCG抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；

5）β-hCG质控品；

6）化学发光液A液和B液；

7）20倍浓缩洗液；

8）反应管。

2.根据权利要求1所述的β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的发光液A液的主要成分为鲁米诺，B液的主要成分是过氧化脲。

3.根据权利要求1所述的β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2um。

4.根据权利要求1所述的β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的β-hCG质控品包括低值质控品和高值质控品。

5.根据权利要求1所述的β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

6.一种制备所述权利要求1的试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）β-hCG校准品的配制：

将β-hCG纯品用含50%牛血清的校准品稀释液配制成校准品浓储液，以企业校准品进行定标，用校准品稀释液稀释至工作浓度，分别为0，5，25，100，250，1000mIU/mL；

（2）β-hCG质控品的配制：

将β-hCG抗原用含有50%牛血清的校准品稀释液稀释配成浓储液，以企业校准品对其定值后，用校准品稀释液分别稀释至8～12mIU/mL和400～600mIU/mL；

（3）磁性颗粒-链霉亲和素悬浮液的制备：

取100mL0.1mol/L 2-吗啉乙磺酸溶液，依次加入10mg磁性颗粒和3mg链酶亲和素，搅拌30min，然后加入10mg/mL碳二亚胺盐酸盐溶液3.5uL，反应1h后，使用磁力架吸附，静止10min，移去液体，加入10mL 0.01mol/L PBS，重复上述过程，共洗涤3次，最后用0.01mol/L PBS定溶至1L即可；

（4）生物素标记的β-hCG抗体的制备

取0.5mgβ-hCG抗体，用硼酸盐缓冲液在2～8℃下透析1～3h；将透析后的抗体加入25ug生物素，同时加入二甲基亚砜，最终浓度为10%，避光反应3h，缓慢振荡；在上述溶液中加入250uL1mol/L氯化铵溶液，常温避光反应30～60min；用0.01mol/L PBS溶液在2～8℃下透析2天，期间换液3～5次；

（5）β-hCG抗体酶结合物的制备

采用高碘酸钠氧化法将β-hCG抗体与辣根过氧化物酶进行偶联后，用酶稀释液将其稀释至工作浓度1:4000，并加入5-20%酶稳定剂，储存于2~8℃；

（6）20倍浓缩洗液的配制

20浓缩洗液包括58gL磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和1‰Proclin300；

（7）化学发光液A液和B液的配制

A液为0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris·HCl，避光保存；B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min混合；

（8）组装：将上述试剂组装成盒，储存于2~8℃；

（9）对采用该方法制的试剂盒的进行物理检查，准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的测定值和稳定性进行测定。