[发明专利]β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的，本发明提供了一种β人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

人绒毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin，HCG）是一种胎盘成滋养层细胞分泌的糖蛋白激素，特异在孕期分泌，成滋养层细胞病变和某些不完全分化的肿瘤也会分泌。其生理作用在于延缓卵巢黄体的退化，从而维持孕酮的生理水平，在妊娠初期起着重要的作用。HCG还影响孕期免疫耐受，保证胎儿不受母体免疫系统攻击。此外，HCG还被报道与胚胎着床和早孕反应有关。

HCG是目前广泛应用的早期妊娠检测指标，用于指示是否存在着床的胚胎。在怀孕的第一周，HCG水平就开始急剧升高，并持续升高约8周的时间，随后开始下降，至20周左右达到稳定水平，维持至分娩后消失。

人绒毛膜促性腺激素由α，β两个不同亚基组成，α亚基与垂体分泌的FSH（卵泡刺激素）、LH（黄体生成素）和TSH（促甲状腺激素）等基本相似，相互间能发生交叉反应，而β亚基的结构各不相似。β-HCG于β-LH结构相近，但最后24个氨基酸延长部分在β-LH中不存在。所以特异性更强的β亚基成为检测中的首选靶点，总β-hCG可以在很大程度上替代总HCG的指示作用。

目前常用的检测β-hCG的方法有放射免疫分析技术（RIA）和酶联免疫分析法（ELISA），但是RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤，且操作繁琐，时间长等缺点；而ELISA灵敏度低，检测范围窄；随着标记免疫技术的迅速发展，各种新的检测方法层出不穷，其中化学发光免疫分析（CLIA）是将化学发光和酶免疫分析结合在此技术上发展起来的，是当今最为敏感的微量免疫测定法，但是检测的的灵敏度和准确度还是不高。

磁微粒具有超顺磁性，在磁场下具磁场响应性，将磁微粒应用于免疫检测的固相，将大大提高反应的表面积，更容易进行固相、液相分离，可提高检测的灵敏度。采用微小的磁微粒作为固相可增加包被表面积，从而增加抗原或抗体的吸附量，既加快了反应速度，也使清洗和分离更简便。

磁分离-酶标记-化学发光技术是酶标记免疫技术的新发展，该技术以微米级磁微粒为载体，利用表面有机物提供的羧基活性基团与蛋白质氨基共价结合，采用抗体进行“搭桥”成免疫磁微粒，可进行抗原、抗体反应。该技术的新颖之处有：(1)利用顺磁铁微粒为固相载体，外包被单克隆抗体，增加抗原、抗体的接触面积及底物发光面积，提高反应的灵敏度，并采用旋转磁场使磁微粒起搅拌作用及分离结合抗原-抗体与游离抗体的作用。(2)在液相反应中，使用发光增强剂，将水分子从发光底物的发光位点排开，同时还可缩短发光的达峰时间。(3)单克隆抗体，提高了反应的特异性。

现有国外化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。尤其是还没有关于β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒广泛用于医疗领域。

发明内容

本发明要解决的问题是提供β-hCG的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，检测范围窄，成本高的缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括：β-hCG校准品；偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；生物素标记的β-hCG抗体；β-hCG抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；β-hCG质控品；化学发光液A液和B液；20倍浓缩洗液；反应管。

进一步，所述的发光液A液的主要成分为鲁米诺，B液的主要成分是过氧化脲。A液为0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris·HCl，避光保存；B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制。

进一步，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1-2um。

进一步，所述的β-hCG质控品包括低值质控品和高值质控品。

进一步，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

（1）β-hCG校准品的配制：