[发明专利]一种用于诊断乳腺癌的MRI对比剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于诊断乳腺癌的MRI对比剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）以疏水型超顺磁性铁氧化物纳米粒子即疏水型SPIO纳米粒子和马来酰亚氨基聚乙二醇-聚己内酯即mal-PEG-PCL为原料，制备负载疏水型SPIO纳米粒子的mal-PEG-PCL纳米胶束即mal-PEG-PCL-SPIO纳米胶束；

（2）在mal-PEG-PCL-SPIO纳米胶束表面引入环状五肽cRGD或/和单链抗体scFv-ErbB，其引入方法包括如下步骤：将环状五肽cRGD或/和单链抗体scFv-ErbB与mal-PEG-PCL-SPIO混合，放置过夜，即在mal-PEG-PCL-SPIO纳米胶束表面引入单链抗体scFv-Erb或/和单链抗体scFv-ErbB，制得用于诊断乳腺癌的MRI对比剂即双靶向cRGD/scFv-ErbB-PEG-PCL-SPIO纳米胶束。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的马来酰亚氨基聚乙二醇-聚己内酯中的聚乙二醇－聚己内酯为两嵌段共聚物，其中聚乙二醇－聚己内酯段的数均分子量分别为2KD和1KD；步骤（2）中所述的放置过夜，是指在4℃下放置过夜。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的mal-PEG-PCL-SPIO纳米胶束是通过如下步骤制备得到：

（1）将疏水型SPIO纳米粒子和mal-PEG-PCL混合溶于有机溶剂中，超声下缓慢滴加到去离子水中，室温下搅拌至有机溶剂挥发完全；

（2）将上述溶液在室温下4000~6000 rpm离心20~40 min，除去下层大的聚集体；将上层溶液再用10000~15000rpm离心2~4h，弃去上层液体，将下层沉淀用去离子水洗涤除去空胶束后，在超声下加去离子水将样品重新分散，过滤即得；

其中，步骤（1）中疏水型SPIO纳米粒子、mal-PEG-PCL 、有机溶剂和去离子水的用量比为，0.5~1.5mg：20~40mg：0.5~1.5ml：5~20ml。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的mal-PEG-PCL-SPIO纳米胶束是通过如下步骤制备得到：

（1）将疏水型SPIO纳米粒子和mal-PEG-PCL混合溶于四氢呋喃中，超声下缓慢滴加到去离子水中，室温下搅拌至四氢呋喃发完全；

（2）将上述溶液室温下5000 rpm离心30 min，除去下层大的聚集体；将上层溶液再用12000rpm离心3h，弃去上层液体，将下层沉淀用去离子水洗涤除去空胶束后，在超声下加去离子水将样品重新分散，用220nm水相滤头过滤即得；

其中，步骤（1）中疏水型SPIO纳米粒子、mal-PEG-PCL 、四氢呋喃和去离子水的用量比为，1mg：30mg：1ml：10ml。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的环状五肽cRGD在与mal-PEG-PCL-SPIO混合前经过如下步骤处理：将环状五肽 cRGD溶解在含EDTA 的HEPES缓冲液中，再向里面加入羟胺；其中环状五肽、HEPES缓冲液和羟胺的体积用量比为4~6：4~6：1~2。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的环状五肽cRGD在与mal-PEG-PCL-SPIO混合前经过如下步骤处理：将环状五肽 cRGD溶解在0.5ml含10%质量分数EDTA 的HEPES缓冲液中，再向里面加入羟胺；其中环状五肽、HEPES缓冲液和羟胺的体积用量比为5：5：2。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的单链抗体scFv-ErbB在与mal-PEG-PCL-SPIO混合前经过如下步骤处理：1) 将单链抗体scFv-Erb用 EDTA溶液预处理10~20min；2) 把巯基乙胺溶解在含EDTA的磷酸盐缓冲液中，在0~8℃孵育10~20min；然后加入到步骤1）的溶液中，在30~40℃孵育，超滤离心；其中步骤1）中单链抗体scFv-Erb和EDTA的用量比为1mg：1~3μL，其中步骤2）中巯基乙胺和磷酸盐缓冲液的用量比为1g~4~6ml。