[发明专利]主动靶向型小干扰核糖核酸输送载体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种小干扰核糖核酸输送载体，具体涉及一种主动靶向型小干扰核糖核酸输送载体及其制备方法。

背景技术

RNA干扰是由双链RNA引发的序列特异性的转录后基因沉默机制[Nature1998，391，806-811]。长度约为20个碱基对的小干扰核糖核酸(siRNA)是RNA干扰的效应分子，在胞内诱导生成基因沉默复合物，序列特异性降解mRNA，从而阻断目标基因的活性[Nat Rev Genet2002，3，737-747]。利用siRNA使基因沉寂而调节目的蛋白功能，在很多疾病的基因治疗中有巨大的应用潜力，如神经退行性疾病、癌症、传染病等。siRNA作为一种新药物已经显示出了巨大的应用前景，目前一些生物制药公司已经致力于siRNA药物研发，但目前世界上还没有一例siRNA药物成功上市，这主要是因为siRNA的血浆半衰期短、生理条件下容易被降解、难以输送至细胞质、并且缺乏靶向能力，因此，siRNA的靶向输运是其能否成功上市的关键瓶颈，设计和合成安全有效的siRNA输运载体已经成为目前siRNA药物研发的重要方向[Mol Pharmaceut2009，6，686-695；Nat Med2007，13，372-377]。

为了克服上述难题，目前已经报道的siRNA输送载体主要有以下四类：1)阳离子脂质体类；2)阳离子聚合物类；3)多肽类偶联物；4)抗体融合蛋白体系。这些输送体系能够保护siRNA不被核酸酶降解、有利于siRNA被靶细胞摄取、并具有体内基因沉默效果[Nature2009，457，426-433；J Control Release2010，144，251-258]。其中，由两亲性阳离子聚合物自组装形成的纳米粒子已经被证明能够输送质粒DNA、反义寡核苷酸和siRNA，是核酸输送载体中最有希望的一类。该类载体能够通过离子相互作用装载核酸、保护其不被核酸酶降解、同时提高细胞摄取[Nat Mater2006，5，79179-6；Biomacromolecules2007，8，1028-1037；Biomaterials2007，28，5358-5368]。

新加坡生物工程与纳米技术研究所杨毅严教授课题组报道了一种阳离子纳米粒子及其PEG化衍生物，能输送质粒DNA，在一系列癌细胞中获得高基因表达率[Biomaterials2007，28，5358-5368]。中国科学技术大学王均教授课题组报道了一种可生物降解的两亲性的三嵌段阳离子共聚物，该共聚物作为siRNA输送载体能靶向酸性神经酰胺酶基因以治疗癌症，该三嵌段共聚物为甲基聚乙二醇-聚己内酯-聚-2-胺乙基磷酸乙二醇[Biomaterials2011，32，3124-3133]。新泽西州立大学Tamara Minko教授课题组报道了一种多功能的新型三嵌段共聚物纳米载体，可用于有效的siRNA输送和基因沉默，该共聚物为聚酰胺-聚乙二醇-聚赖氨酸[ACS Nano2011，5，1877-1887]。但是，这些siRNA输送载体在生理条件下，对目标部位的靶向性仍然不够好。

在siRNA输送载体上连接上靶分子，可以提高siRNA输送载体对目标部位的靶向性。北京大学罗莹教授课题组报道了一种中性的交联了的树枝状siRNA输送体系，该树枝状siRNA输送体系主体为聚酰胺树枝状聚合物，其末端氨基上修饰了酰肼和乙酰半乳糖胺，修饰后的树枝状聚合物可以与siRNA通过离子相互作用形成复合物，最后用戊二醛对复合物进行交联，以保护siRNA不被降解，体系中半乳糖胺可起到受体介导的主动靶向作用，提高siRNA的靶向输送和基因沉默效果[Bioconjugate Chem2012，23，174-183]。但是，该载体与siRNA的结合能力不够强，最后需要使用戊二醛对复合物进行交联，以保护siRNA不被降解。

根据上述siRNA输送载体的国内外研究现状分析，设计和合成安全有效的siRNA输运载体、提高siRNA对肿瘤组织的靶向性是研究的主要趋势。

发明内容

本发明提供了一种主动靶向型小干扰核糖核酸输送载体及其制备方法，该主动靶向型小干扰核糖核酸输送载体能有效避免siRNA被核酸酶降解，将siRNA高特异性靶向输送至肿瘤部位。

一种主动靶向型小干扰核糖核酸输送载体，由作为载体骨架的可生物降解的高分子化合物与作为载体侧链的靶分子和氨基化合物共价偶联得到；

所述的高分子化合物、靶分子和氨基化合物含有能发生共价偶联的反应官能团；