[发明专利]一种测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉中虫草素、腺苷、甘露醇的方法

权利要求书

1.一种测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉中虫草素、腺苷、甘露醇的方法，其特征在于利用高效液相色谱—质谱联用仪同时测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉中的虫草素、腺苷、甘露醇。

2.如权利要求1所述一种测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉中虫草素、腺苷、甘露醇的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（一）  样品处理

精确称取冬虫夏草样本的菌丝体粉0.50 g,均匀研磨、混合,在容量瓶中用超纯水定容 ,水浴超声提取30分钟，然后用0.45μm过滤膜过滤，所得续滤液用高效液相色谱—质谱联用仪进行测定；

（二） 高效液相色谱—质谱联用仪的测定条件

（1）液相条件：色谱柱为Thermo BioBasic-18 PIONEER（150 mm × 2.1 mm, i.d. 5 μm）；柱温为30℃，进样量为5μl；流动相为0.05 mol/L甲酸-甲醇混合溶液(94:6, v/v)，流速为0.2 ml/min；

（2）质谱条件：离子源为电喷雾离子源（ESI），虫草素、腺苷采用正电离模式,甘露醇采用负电离模式;保护气体(N2)，流速为40 A.U.;辅助气体(He)，流速为5 A.U.；毛细管温度为350℃,喷雾电压为4.0 kV,毛细管电压是28 V；ESI接口和质谱参数进行优化,以达到最佳；

（三）  绘制标准曲线

分别称取标准品腺苷、虫草素、甘露醇适量，用超纯水溶解使腺苷和虫草素的浓度为100mg/L,甘露醇的浓度为500mg/L,作为贮备液；然后分别适量储备液，用纯水稀释，依次配置腺苷和虫草素浓度均为10.0 mg/L、20.0 mg/L、30.0 mg/L、40.0 mg/L、50.0 mg/L,甘露醇浓度为100.0 mg/L、200.0 mg/L、300.0 mg/L、400.0 mg/L、500.0 mg/L的混合标准工作液，将混合标准工作液进样10ul在所述色谱和质谱条件下进行测定，以各组分的峰面积对浓度作回归分析，得到峰面积-浓度标准曲线。

3. 如权利要求1或2所述的一种测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉中虫草素、腺苷、甘露醇的方法，其特征在于：样品和标准品的测定采用选择性离子检测模式（SIM）进行质谱采集。