[发明专利]一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种阿维菌素产生菌，其特征在于，所述产生菌具有以下特征：

(a)所述产生菌的基因组中的aveD基因被失活、或aveD基因功能丧失、或aveD基因缺失、或不表达aveD基因、或不表达AveD蛋白、或表达的AveD蛋白无功能；

(b)所述产生菌的基因组中aveC基因被失活、或aveC基因功能丧失、或aveC基因缺失；或不表达aveC基因、或不表达AveC蛋白、或AveC蛋白无功能；

(c)所述产生菌的基因组中含有或表达aveC的同源基因；且所述的aveC的同源基因为梅岭霉素(meilingmycin)生物合成基因meiC；和

(d)所述的产生菌的发酵产物中，阿维菌素B2a组分的相对含量满足式I：

B/A≥35％

式I

其中，

B为发酵产物中阿维菌素B2a组分的质量；

A为发酵产物中所有阿维菌素组分总的质量；

并且，所述的产生菌为除虫链霉菌(Streptomyces avermectinius)。

2.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述B/A≥40％。

3.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述B/A≥95％。

4.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述AveD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

5.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述AveC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述的meiC基因来源于南昌链霉菌(Streptomyces nanchangensis)。

7.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述的梅岭霉素(meilingmycin)生物合成基因meiC编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：3所示。

8.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述的生产菌是除虫链霉菌(Streptomyces avermectinius)mVL1003，保藏编号为CGMCC No.6678。

9.权利要求1中所述的阿维菌素产生菌的用途，其特征在于，它被用做发酵生产阿维菌素B2a组分的工程菌。

10.一种制备阿维菌素B2a组分的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)培养权利要求1所述的阿维菌素产生菌，从而获得含有阿维菌素B2a的发酵产物；和

(b)从发酵产物中分离出所述的阿维菌素B2a组分。

11.一种生产阿维菌素B1a组分的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)培养权利要求1所述的阿维菌素产生菌，从而获得含有阿维菌素B2a组分的发酵产物；

(b)从发酵产物中分离出所述的阿维菌素B2a组分；和

(c)将分离的阿维菌素B2a转化为阿维菌素B1a组分。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，步骤(c)所述转化是将B2a组分高温水解，从而获得B1a组分。

13.一种生产伊维菌素的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)培养权利要求1所述的阿维菌素产生菌，从而获得含有阿维菌素B2a组分的发酵产物；

(b)从发酵产物中分离出所述的阿维菌素B2a组分；和

(c)将分离的阿维菌素B2a组分转化为伊维菌素。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，步骤(c)所述转化是用三-正-丁基氢化锡对阿维菌素B2a进行还原和脱保护，获得伊维菌素。