[发明专利]一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用。具体地，对野生型的阿维菌素产生菌中的aveD基因进行失活，可以获得消除A组分，只产生B组分的菌株；对aveD基因和aveC基因同时失活，并在此基础上回补aveC的同源基因（优选梅岭霉素生物合成基因簇中的meiC基因），获得的突变体发酵产物中95wt%以上都为阿维菌素B2a。将产物阿维菌素B2a作为前体，可以直接用于大量合成高纯度的阿维菌素B1a和伊维菌素。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用。

背景技术

阿维菌素(Avermectin)是一种由革兰氏阳性菌除虫链霉菌(Streptomycesavermectinius)产生的一类十六元大环内酯类抗生素。阿维菌素是一种高效，无公害的生物农药，具有广谱的杀虫抗螨活性，并且阿维菌素对人畜毒副作用低，体内残留低，这些特点使得阿维菌素在家畜寄生虫感染的治疗和农业病虫害防治方面均有广泛的应用，是生产绿色食品的最佳用药。

通常，在阿维菌素发酵过程中，产生Ａ组分（Ａ1a和Ａ2a等）和Ｂ组分（B1a和B2a等）(见图1)，以B1a组分为最有效成份，而B2a组份通常用作合成另外一种生物农药伊维菌素的前体。以阿维菌素为前体半合成的衍生物依维菌素（Ivermectin）和多拉菌素(Doramectin)具有更高的应用价值，前者将B1a的22为和23位双键换为单键，后者则将B1a的25位的侧链基团换为环己基。

目前阿维菌素和伊维菌素生产上需要从天然发酵产物中加以提纯，处理过程非常复杂，得率低，还需要使用甲苯等有毒溶剂。此外，尚没有发酵产物只有B2a组分的菌株。

因此本领域迫切需要开发高产的发酵组份明确单一的阿维菌素产生菌。

发明内容

本发明的目的就是提供一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用。

在本发明的第一方面，提供了一种阿维菌素产生菌，所述的产生菌的发酵产物中，阿维菌素B2a组分的相对含量满足式I：

B/A≥35%

式I

其中，

B为发酵产物中阿维菌素B2a组分的质量；

A为发酵产物中所有阿维菌素组分总的质量。

在另一优选例中，B/A≥40%，更佳地≥50%，更佳地≥60%，更佳地≥70%，更佳地≥80%，更佳地≥90%，更佳地≥95%，最佳地≥99%。

在另一优选例中，所述的阿维菌素产生菌为链霉菌属。

在另一优选例中，所述的阿维菌素产生菌为除虫链霉菌(Streptomycesavermectinius)。

在另一优选例中，所述产生菌的基因组中的aveD基因被失活、或aveD基因功能丧失、或aveD基因缺失、或不表达aveD基因、或不表达AveD蛋白、或表达的AveD蛋白无功能。

在另一优选例中，所述AveD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

在另一优选例中，所述产生菌的基因组中aveC基因被失活、或aveC基因功能丧失、或aveC基因缺失；或不表达aveC基因、或不表达AveC蛋白、或AveC蛋白无功能；并且，所述产生菌的基因组中含有或表达aveC的同源基因；或所述产生菌中表达AveC蛋白的同源蛋白。

在另一优选例中，所述AveC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。