[发明专利]小卷蛾斯氏线虫的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种小卷蛾斯氏线虫的制备方法，其用于防治隐蔽性害虫（例如钻蛀和土栖），属于林木害虫生物防治领域。

背景技术

钻蛀和土栖等隐蔽性害虫是重要的农林害虫种类，并随着农业结构调整其危害的严重性日益突出。该类害虫的栖息和危害部位隐蔽、为害周期长、种群一旦建立就能稳定增长，而目前又缺乏行之有效的防治方法，因此成为国际上公认的难于防治的重大害虫种类。目前生产中以一些高毒、高残留的化学药剂防治为主，但往往因其隐蔽性的生活特征而难于取得理想的效果。另一方面，长期单纯使用化学农药导致目标害虫抗药性迅速增强、次要害虫上升爆发成灾，同时引起生态平衡破坏、环境污染等一系列问题，并严重影响农林产品生产安全。随着人们环境保护和可持续发展意识的不断提高，对无公害、绿色农产品的需求日益迫切，生物防治作为害虫综合治理的一种重要手段受到越来越多的重视。

昆虫病原线虫作为一类重要的新型杀虫剂，对隐蔽性害虫的防治表现出独特优势和良好的商业前景。昆虫病原线虫寄主范围较广，对寄主具有主动搜索能力，特别是对栖息和危害部位比较隐蔽的如土栖性和钻蛀性害虫具有独特的防治优势；可人工大量培养；对人、畜、环境安全。其体内带有共生细菌，随线虫进入昆虫体内，造成昆虫败血症而死亡。在工业化国家昆虫病原线虫制剂占生物农药市场销售额的13%，仅次于苏云金杆菌产品。澳大利亚、美国、德国、荷兰、加拿大等国家的数十家商业化公司均可提供昆虫病原线虫供实际应用。广泛用于农林、牧草、花卉、和卫生等重要害虫。自1985年由中国农科院生防所从澳大利亚引进大量离体培养昆虫病原线虫技术以来，我国已成功用于对桃小食心虫(Carposina onens)、小木蠢蛾(Holcocerusinsularis)等多种林业害虫的防治，其中防治苹果园桃小食心虫的面积已超过7000公顷，取得了明显的经济效益和社会效益。

但目前的大量繁殖技术和依赖于低温的贮存技术使昆虫病原线虫生产成本过高，而限制了它对害虫控制作用的充分发挥和进一步的推广应用，同时也使昆虫病原线虫的生产规模滞留于中试和商业小量生产阶段，因此昆虫病原线虫大量繁殖技术和常温贮存技术的研究具有重要的科学意义和应用价值。

发明内容

本发明涉及一种小卷蛾斯氏线虫成品的制备方法：将小卷蛾斯氏线虫制成微胶囊的形式。

本发明通过如下技术方案实现：

一种小卷蛾斯氏线虫成品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将线虫悬浮液和I液混合，将所述混合液滴入II液，静置后，从II液中滤出微胶囊，其中所述的I液包括：10%甘油、0.075%福尔马林、2%海藻糖、余量为蒸馏水；所述的II液包括：10%甘油、0.075%福尔马林、0.5%CaCl₂、余量为蒸馏水。所述的线虫悬浮液是将线虫加入适量水中配成的。

根据本发明，还提供一种小卷蛾斯氏线虫成品的制备方法，其特征在于，包括将线虫悬浮液和I液混合，将线虫的浓度调至1×10⁴IJs/ml—3×10⁴IJs/ml（优选1.5-2×10⁴IJs/ml），将所述线虫悬浮液和I液的混合液以100-130滴/min（优选110-120滴/min）的速度滴入II液，静置（优选20-60分钟，优选30-40分钟）后，用筛网将成型的微胶囊从II液中滤出。

根据本发明，优选地，所述方法包括将所述混合液悬于II液上方10cm左右。其中优选所述的线虫悬浮液的浓度≥2×10⁴IJs/ml。

根据本发明，上述小卷蛾斯氏线虫成品的制备方法中使用的小卷蛾斯氏线虫可以通过任何方法获得。

根据本发明，上述小卷蛾斯氏线虫成品的制备方法中使用的小卷蛾斯氏线虫可以通过本发明中的大量繁殖方法获得。本发明进一步提供一种小卷蛾斯氏线虫的大量繁殖方法，其特征在于，所述方法包括，将线虫共生菌接入培养液中培养，将所述经培养的线虫共生菌菌液接入装在不锈钢培养盒中的固态培养基中培养，再接入线虫悬浮液，培养线虫，并收获线虫，其中所述的线虫悬浮液是将线虫加入适量水中配成的。

根据本发明，所述线虫悬浮液的浓度≥2×10⁴IJs/ml。

优选的，所述不锈钢培养盒为长方体，特别优选长35cm，宽25cm，高20cm。