[发明专利]虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列扩增引物及其设计和扩增方法

权利要求书

1.虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列扩增引物，其特征是由两条单链寡核苷酸链组成，其中轻链引物为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；重链引物为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列扩增引物，其特征是所述的虾虎鱼类包括中华乌塘鳢、青弹涂鱼、斑纹舌虾虎鱼、髭缟虾虎鱼、孔虾虎鱼、绿斑细棘虾虎鱼、红狼牙虾虎鱼、普氏细棘虾虎鱼、斑尾刺虾虎鱼、大弹涂鱼、舟山缰虾虎鱼、平头竿虾虎鱼、矛尾刺虾虎鱼、双带缟虾虎鱼、犬齿背眼虾虎鱼。

3.一种如权利要求1所述的虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列扩增引物的设计方法，其特征是登录NCBI网站中的GenBank数据库搜索已测定的其他物种的虾虎鱼类及近缘鱼类物种的线粒体基因组的16S rRNA基因和tRNA-Met基因序列，经同源性比较，找到保守序列，并利用Premier Primer5.0软件设计出虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列扩增引物。

4.一种对虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列扩增的方法，其特征是采用如权利要求1所述的虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列扩增引物对待测样品的DNA模板溶液进行PCR扩增。

5.如权利要求4所述的一种对虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列进行扩增的方法，其特征是PCR扩增的条件为：95℃预变性5min，然后95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min30s，共35个循环，最后72℃延伸5min。

6.如权利要求4所述的一种对虾虎鱼类线粒体ND1基因全序列进行扩增的方法，其特征是PCR扩增的反应体系组成为：PCR反应体系为25μL，内含2.5mM的 dNTP 2μL、10×Taq DNA聚合酶 Buffer 2.5μL、10μM的轻链引物和重链引物各1μL、5U/ul的Taq DNA聚合酶0.2μL、含100ng的DNA模板溶液 1μL及ddH₂O 17.3μL。

7.如权利要求4所述的一种对虾虎鱼类线粒体ND1基因全序进行扩增的方法，其特征是所述的待测样品来自中华乌塘鳢、青弹涂鱼、斑纹舌虾虎鱼、髭缟虾虎鱼、孔虾虎鱼、绿斑细棘虾虎鱼、红狼牙虾虎鱼、普氏细棘虾虎鱼、斑尾刺虾虎鱼、大弹涂鱼、舟山缰虾虎鱼、平头竿虾虎鱼、矛尾刺虾虎鱼、双带缟虾虎鱼、犬齿背眼虾虎鱼。