[发明专利]检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒及多肽配体

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒及多肽配体。

背景技术

近年研究提示炎症与免疫在动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的发生、发展中起重要作用，提示动脉粥样硬化可能是一种慢性炎症性疾病。研究发现，白细胞分化抗原40（CD40）信号通路参与了动脉粥样硬化斑块内主要细胞成分（血管内皮细胞、血管平滑肌细胞以及巨噬细胞）的炎症反应的调节，参与了动脉粥样硬化的发生和发展。存在于动脉粥样硬化斑块内的细胞通过CD40-CD40配体相互作用，导致自身活化，表达和分泌有利于免疫应答发生、炎症反应、血凝和血栓形成的蛋白质细胞因子，而最终导致粥样硬化斑块病变的恶化。CD40配体（CD40L）可激活在动脉粥样硬化斑块中的关键性细胞成分，如黏附分子、细胞因子、基质金属蛋白酶（MMPs）、组织因子等的产生，导致斑块的不稳定和破裂。在AS的免疫反应调节中CD40-CD40配体的相互作用非常重要，它们的相互作用显著影响AS相关细胞的功能，并且与斑块的发生发展密切相关。

CD40L也称Pg39、CD154，由261个氨基酸组成的Ⅱ型跨膜蛋白，其三维结构类似于肿瘤坏死因子α（TNF-α），属于TNF家族细胞因子。主要表达于活化的CD4⁺T细胞表面。近年发现，除了T细胞，CD40L还表达于B细胞、自然杀伤细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞以及非造血系统起源的内皮细胞等。血小板在激活中表达CD40L，并在激活后数分钟至数小时降解为可溶性白细胞分化抗原40配体（sCD40L）。sCD40L可通过促进血小板-单核细胞聚集和产生活性氧自由基维持炎症反应，其在动脉粥样斑块形成过程中的作用目前已经在研究中证实，急性冠状动脉综合症（ACS）病人的sCD40L值较正常人又明显升高，这预示着sCD40L水平对ACS临床诊断及病情监测具有一定意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种多肽配体。

本发明所提供的多肽配体，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。

本发明的另一个目的是提供一种检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒。

本发明所提供的检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含所述的多肽配体。

所述试剂盒还包括辣根过氧化物酶标记的sCD40L单克隆抗体。

所述试剂盒还包括已知浓度的重组全长CD40L抗原稀释液作为标准品。

所述试剂盒还包括鲁米诺作为化学发光体系的底物，对碘苯酚作为发光增强剂。

本发明的又一个目的是提供一种检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒的制备方法。

本发明所提供的检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

将所述多肽配体按终浓度0.5μg/ml、1.0μg/ml或2.0μg/ml加入到20mmol pH4.0醋酸盐缓冲液或20mmol pH7.4磷酸盐缓冲液或50mmol pH9.6碳酸盐缓冲液中混匀后，加入化学发光板内，每孔100μl，4℃温浴16-22小时，弃去孔内液体后加入含有牛血清白蛋白或胎牛血清的20mmol pH7.4的磷酸盐缓冲液120μl，37℃下静置2小时后，弃去孔内液体，干燥发光板，得到包被多肽配体的板条。

所述方法还包括以下步骤：将sCD40L单克隆抗体用辣根过氧化物酶标记。

所述方法还包括以下步骤：将重组全长CD40L抗原用蛋白稳定剂稀释成6个梯度浓度，分别为0ng/ml、1.0ng/ml、2.5ng/ml、5.0ng/ml、10.0ng/ml和20.0ng/ml。

所述方法还包括以下步骤：制备化学发光底物液A液和B液：

用超纯水中配制0.1mol/L pH8.2-8.7的Tris-HCl缓冲液，加入终浓度为3mmol/L的鲁米诺、0.3mmol/L的Tween20和碘苯酚混合溶液，作为A液；

用超纯水配制的0.1mol/L pH4.4-4.8的柠檬酸缓冲液，加入终浓度为30%的H₂O₂溶液，作为B液。

所述多肽配体在制备检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。

所述检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒的检测方法如下：

（1）自2-8℃冰箱中取出所述试剂盒，室温平衡30分钟。

（2）取出包被板条，插入发光板架上。