[发明专利]一种FK506-A化合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体地说涉及一种大环内酯类化合物FK506-A化合物的制备方法。

技术背景

FK506（Tacrolimus）是筑波链霉菌（Streptomyces tsukubaensis）产生的大环内酯类化合物，其目前被用于制备免疫抑制类药物。该化合物的分子式为C₄₄H₆₉NO₁₂，分子量为804.02，其分子内具有23元的环状结构，其结构式如下：

据文献报道，FK506性质不稳定，可发生异构化反应，产生同分异构体（Tetrahedron Letters，Vol31，No.45，pp6477-6480，1990）。将结构如式（1）所示的异构体命名为FK506-A化合物。

式（1）

目前的研究中，FK506-A被认为是FK506不稳定产物，因此鲜有人对其进行深入的探讨和研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种FK506-A化合物的制备方法，该方法操作简便、产品纯度高，适于工业化生产应用。

为实现本发明目的，本发明提供了FK506-A化合物的制备方法，该化合物结构如式（1）所示

该方法包括以下步骤：

a、将FK506于110-150℃下加热2-25分钟，得到FK506-A粗品；

b、向FK506-A粗品中加入有机溶剂，溶解后加入硅胶，搅拌均匀后干燥，得到干样；

c、将干样加入装有硅胶的层析柱中，加入洗脱溶剂进行洗脱，收集经HPLC测定纯度≥75%的洗脱液，浓缩至干，所得固体进行结晶得到FK506-A纯品。

本发明a步骤所述加热，其温度最好为120-130℃。在该温度下，FK506反应更完全，且副产物较少。

本发明b步骤所述有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、乙醚、乙腈、乙酸丁酯、丙酮、乙醇、甲醇中任意一种。优选氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇中任意一种。

本发明所述硅胶，其粒度最好为100-400目。该粒度下的硅胶吸附作用优良，且较易洗脱。

本发明b步骤所述硅胶，其用量最好为FK506-A粗品质量的1-2.5倍。

本发明c步骤所述硅胶，其用量为FK506-A粗品质量的8-15倍，优选10倍。

本发明c步骤所述洗脱溶剂为石油醚、正己烷、乙酸乙酯、乙醚、异丙醚、乙腈、乙酸丁酯、丙酮、乙醇、甲醇中任意一种或几种的混合液，优选石油醚、正己烷、乙酸乙酯、乙醚、异丙醚、乙腈、丙酮中任意一种或两种的混合液。

本发明c步骤所述浓缩，最好是在30-60℃下减压浓缩。

本发明c步骤所述结晶，其方法是向每克固体中加入5-15毫升结晶溶剂，溶解后，缓慢降温结晶，待晶体不再析出后，过滤，用结晶溶剂洗涤滤饼1-2次后将滤饼置于30-60℃下真空干燥，所述结晶溶剂是正己烷、乙酸乙酯、乙醚、异丙醚、乙腈、乙酸丁酯、丙酮、乙醇、异丙醇、甲醇、水中任意一种或几种的混合液，优选正己烷、乙酸乙酯、乙醚、乙腈、丙酮、异丙醇、水中任意一种或两种的混合液。

上述“每克固体中加入5-15毫升结晶溶剂，溶解”，是以能够使固体完全溶解为原则。本领域技术人员可根据所选择结晶溶剂的性质，使用加热或超声等辅助溶解手段来促进其溶解。

本发明所述FK506-A是一种大环内酯类化合物，药理实验研究表明，它具有免疫抑制作用，可用于制备免疫抑制类药物。本发明所述FK506-A的制备方法，利用了FK506的异构化反应，通过控制反应温度和时间，提高了反应效率，结合后续的硅胶柱层析分离以及重结晶处理，制得了高纯度的FK506-A产品。本发明所述方法还具有操作简便、成本低廉的优点，适于工业生产。

附图说明

图1是FK506-A的液相-质谱图。

图2是FK506-A的¹HNMR谱图。

图3是FK506-A的¹³CNMR谱图。

图4是FK506-A的HMQC谱图。

图5是FK506-A的HMBC谱图。

图6是FK506-A的¹H-¹H cosy谱图。

具体实施方式