[发明专利]一种检测肉及肉制品中牛源性成分的方法

权利要求书

1.一种检测肉及肉制品中牛源性成分的牛特异性引物，其特征在于，

上游引物为：5’-AATATAATTTGGGTTAACTCCACAGC-3’；

下游引物为：5’-GCCATATGGTTAAAATTAGTAGTGGAGTG-3’。

2.含有权利要求1所述引物的试剂盒。

3.一种与权利要求1所述引物配合使用的探针，其特征在于，其核苷酸序列为：

5’-F-CACAGCCTTCTAATTAGCTTTACAAGCCTCC-M-3’；其中，F为荧光报告基团，M为荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为TAMRA。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括脊椎动物通用引物和探针，

上游引物为：5’-TACGACCTCGATGTTGGATCA-3’；

下游引物为：5’-AGATAGAAACCGACCTGGAT-3’；

所述探针为：

5’-F-CCGGTCTGAACTCAGATCACGTAGGA-M-3’,其中，F为荧光报告基团，M为荧光淬灭基团；优选F为FAM或HEX；M为TAMRA。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液、纯牛肉DNA标准品中的一种或几种。

7.一种检测肉及肉制品中牛源性成分的方法，其特征在于，

1）待测样品匀浆，提取DNA；

2）提取纯牛肉DNA，进行浓度梯度稀释，制作标准品；

3）分别以步骤1）和步骤2）中提取的DNA为模板，用权利要求1所述的引物、权利要求3所述的探针和权利要求5所述的通用引物和探针进行PCR扩增，以纯牛肉标准品的剂量-效应曲线为标准曲线，计算待测样品中牛源性成分的百分含量。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR为单重PCR，其中10μl反应体系包含：

使用引物/探针类型牛特异性引物/探针通用引物/探针Taq酶预混液5μl5μl上游引物5μM 0.7-0.9μl5μM 0.5-0.7μl下游引物5μM 0.7-0.9μl5μM 0.5-0.7μl探针5μM 0.3-0.6μl5μM 0.3-0.6μl模板DNA2μl2μl蒸馏水补足10μl补足10μl

或双重PCR，其中10μl反应体系包含：