[发明专利]一种基于电化学还原氧化石墨/金纳米粒子复合膜细胞传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于电化学还原氧化石墨/金纳米粒子复合膜细胞传感器的制备方法，其特征在于，将剥落氧化石墨烯电镀沉积到玻碳电极表面，清洗氮气吹干，在氯金酸溶液中电镀沉积，制备电化学还原氧化石墨/金纳米粒子修饰的玻碳电极。在修饰好的电极表面上滴加细胞悬浮液，培养孵育，以达到细胞固定的目的，制得基于石墨烯金纳米粒子修饰自组装电化学细胞传感器。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电化学还原氧化石墨/金纳米粒子修饰的玻碳电极制备方法如下：将1mM HAuCl₄溶解于0.5M H₂SO₄中，配置0.05mM的HAuCl₄溶液，将Hummers氧化制备的氧化石墨烯，用PB缓冲液配置成0.5mg/mL的氧化石墨烯溶液。分别用控制电位电解库伦法电镀沉积到玻碳电极表面。在修饰好的玻碳电极表面，滴加细胞悬浊液，在CO₂细胞培养箱中，37℃孵育，制备得到自组装电化学细胞传感器。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，控制电位电解库伦法进行电镀沉积是具体条件如下：将打磨超声处理后的玻碳电极浸入0.5mg/mL的氧化石墨烯溶液，控制电位电解库伦法，电解电位为-1.2，电解时间为100s；清洗氮气吹干后，置于0.5mM的HAuCl₄溶液，电解电位为-0.5，电解时间为100s。清洗，氮气吹干，4℃备用。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，玻碳电极清洁方法如下：将玻碳电极置于Piranha溶液中浸泡15min，依次用0.3、0.05μm的Al₂O₃抛光粉将电极表面抛成镜面，再用体积比1：1的硝酸、无水乙醇、超纯水超声清洗5min，氮气吹干，4℃备用。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞PBS悬浊液滴加量为10μl，PBS的pH＝7.4，浓度为0.01M。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述细胞浓度为1.6×10⁶个/mL。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在37℃孵育20～100min。

8.一种权利要求1所述方法构建的免疫电极的应用，其特征在于，步骤如下：取出已修饰完成的细胞传感电极，依次滴加10μL不同浓度的丙烯酰胺标准品刺激后的细胞PBS悬浊液，37℃孵育20～100min后，采用微分脉冲伏安法和交流阻抗法考察工作电极界面的变化，并对电极表进行表征。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，丙烯酰胺细胞刺激具体方法如下：用细胞培养液(含胎牛血清蛋白)配制不同终浓度的丙烯酰胺细胞刺激物进行细胞培养，培养12～36h后，离心，用PBS清洗后，溶于PBS培养液，进行试验。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，离心转速为800r/min，离心时间为5min；微分脉冲伏安法条件为：扫描范围：-0.2～0.6V，振幅：0.05V；交流阻抗法条件为：初始电位：0.2V，振幅：0.05V，频率范围1-100kHz。