[发明专利]一种用于过敏原检测的L半胱氨酸/金纳米粒子复合膜细胞传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于电化学L-半胱氨酸/金纳米粒子复合膜细胞传感器的制备方法，其特征在于，将电极置于氯金酸溶液中电镀沉积，L-半胱氨酸经自组装富集在已修饰有纳米金颗粒的电极表面，清洗氮气吹干后，获得电化学L-半光氨酸/金纳米粒子修饰的金电极。在修饰好的电极表面上滴加细胞-胶原混合悬浮液，培养孵育，以达到细胞固定的目的，制得基于L-半胱氨酸金/纳米粒子修饰的自组装电化学细胞传感器。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电化学L-半光氨酸金纳米粒子修饰的金电极制备方法如下：将1mM HAuCl₄溶解于0.5M H₂SO₄中，配置0.05mM的HAuCl₄溶液，将0.121g的L-半胱氨酸，用醋酸PB缓冲液配置成0.5mg mL^-1的L-半胱氨酸溶液。通过电沉积和自组装将L-半胱氨酸和纳米金沉积到金电极表面。在修饰好的金电极表面，滴加细胞-胶原混合悬浊液，在CO₂细胞培养箱中，37℃孵育，制备得到自组装电化学细胞传感器。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，控制电位电解库伦法进行电镀沉积具体条件如下：将彻底清洁的金电极氮气吹干后，置于0.5mM的HAuCl₄溶液，电解电位为-0.5，电解时间为100s。清洗，氮气吹干，4℃备用。再置于0.5％的L-半胱氨酸醋酸溶液中，37℃下浸泡5h，用超纯水反复清洗，吹干。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，金电极清洁方法如下：将金电极(Φ＝2mm)置于Piranha溶液中浸泡15min后，分别用0.3μm，0.05μm的Al₂O₃抛光粉末，将电极表面打磨抛成镜面，再用1：1(V：V)的硝酸、无水乙醇、超纯水依次超声清洗5min，氮气吹干，4℃备用。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，购买的肥大细胞按照10⁶ml^-1接种于六孔板中，每孔3ml培养基，置于37℃5％CO₂的培养箱中培养，每七天将悬浮细胞按照10⁶ml^-1转移到新的培养板中继续培养，细胞分化成熟后，收集细胞进行鉴定，密度控制在10⁷—10¹⁰ml^-1，采用鼠尾I型胶原(浓度为1.5M)与获得的肥大细胞(密度1.5×10⁷mL^-1)进行混合，调整pH至中性，取10μl滴加电极，在37℃孵育30min。

6.一种权利要求1所述方法构建的检测电极的应用，其特征在于，步骤如下：取出已修饰完成的细胞传感电极，依次滴加10μL不同浓度的C48/80标准品刺激后的细胞PBS悬浊液，37℃孵育20～100min后，采用微分脉冲伏安法和交流阻抗法考察工作电极界面的变化，并对电极表进行表征。

7.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，离心转速为800r/min，离心时间为5min；微分脉冲伏安法条件为：扫描范围：-0.2～0.6V，振幅：0.05V；交流阻抗法条件为：初始电位：0.2V，振幅：0.05V，频率范围1-100kHz。