[发明专利]采用标签蛋白人源化嵌合抗体作为阳性对照物的间接免疫检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种采用标签蛋白人源化嵌合抗体作为阳性对照物的间接免疫检测方法，其步骤如下：

（1）针对要检测的靶标抗体，制备用于反应的包被有重组目标抗原的固相载体，

（2）制备阳性对照，

（3）在所述固相载体上进行间接免疫检测反应；

其特征在于：所述重组目标抗原指人工重组的带标签蛋白的目标抗原物，所述重组目标抗原中的目标抗原指能与所述靶标抗体特异性结合的抗原物；

所述阳性对照物采用抗重组目标抗原中的标签蛋白的人源化嵌合抗体，

所述人源化嵌合抗体是指抗体Fc端由人的抗体基因编码，抗体Fab端则由小鼠抗体的基因编码，即将标签蛋白的单克隆抗体的轻、重链可变区基因插入到含有人源抗体恒定区基因的表达载体中，转入动物细胞中表达得到的标签蛋白的人源化嵌合抗体。

2.根据权利要求1所述的间接免疫检测方法，所述标签蛋白的单克隆抗体指Flag、His、GST、GFP、myc或HA的单克隆抗体。

3.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述标签蛋白人源化嵌合抗体指His人源化嵌合抗体或GST人源化嵌合抗体。

4.根据权利要求1~3任一所述的间接免疫检测方法，其特征在于：所述阳性对照物溶于阳性对照稀释液中。

5.用于权利要求1~4任一所述间接免疫检测方法的试剂盒，包括用于承载检测反应的固相载体和阳性对照物，其特征在于：

所述固相载体上包被有重组目标抗原，

所述重组目标抗原指人工重组的带标签蛋白的目标抗原物；

所述阳性对照物指抗重组目标抗原物中所带标签蛋白的人源化嵌合抗体，

所述人源化嵌合抗体是指：将标签蛋白的单克隆抗体的轻、重链可变区基因插入到含有人源抗体恒定区基因的表达载体中，转入动物细胞中表达得到的标签蛋白人源化嵌合抗体。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，所述标签蛋白的单克隆抗体指Flag、His、GST、GFP、myc或HA的单克隆抗体。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述标签蛋白人源化嵌合抗体指His人源化嵌合抗体或GST人源化嵌合抗体。

8.根据权利要求5~7任一所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照物溶于阳性对照稀释液中，所述阳性对照稀释液的配方为：每1000ml溶液中含NaH₂PO₄·2H₂O 0.28g，

Na₂HPO₄·12H₂O 3.08g，NaCl 8.78g，牛血清白蛋白5～20g Proclin300 0.5mL，Tween20

0.5mL，溶剂为纯化水。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照物溶于阳性对照稀释液中，所述阳性对照稀释液的配方为：每1000ml溶液中含NaH₂PO₄·2H₂O 0.28g，Na₂HPO₄·12H₂O3.08g，NaCl 8.78g，牛血清白蛋白10g Proclin300 0.5mL，Tween20 0.5mL，溶剂为纯化水。

10.根据权利要求8任一所述的试剂盒，其特征在于，固相载体上包被重组目标抗原所用的封闭液为：每1000ml溶液中含有NaH₂PO₄·2H₂O 0.60g，Na₂HPO₄·12H₂O 5.80g，牛血清白蛋白BSA 5～20g，Proclin300 1mL，溶剂为纯化水。