[发明专利]采用标签蛋白人源化嵌合抗体作为阳性对照物的间接免疫检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及诊断试剂的制备，特别是以标签蛋白人源化嵌合抗体作为通用诊断试剂的阳性对照的应用。

背景技术

应用间接法免疫技术，如间接酶联免疫法、化学发光法等测定样品中抗体的浓度是常用的检测方法，该方法的原理是在固相载体上包被抗原蛋白，加入待测样品，待测样品中的抗体与包被抗原反应，再加入酶标记的二抗，即可检测样品中是否有与抗原结合的抗体。在此类试验中，必须设立阳性对照孔，阳性对照多用临床病人的血清或其他形式的人血清。但人源性血制品，很可能含有致病性传染物质，对操作者存在潜在的威胁，同时在配制阳性对照过程中需要大量血清或血浆，而有些病的血清或血浆又比较难得到。因此应用人源血液作为阳性对照，对于制备大量检测试剂盒产品而言，原料受到客观的限制。所以寻求一种阳性对照替代品，应用于间接法检测抗体类的试剂盒成为大家共同的意愿。

蛋白标签的用途，截至目前，主要是用于对表达蛋白进行鉴定与纯化。即通过基因工程的方式，在目标蛋白上加上标签序列，在表达纯化出的蛋白上就会带上标签蛋白序列，常用的标签蛋白有Flag、His、GST、GFP、myc、HA等，其中HIS和GST是最常用的纯化标签分子。

His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。其分子量较小，并且较容易分离和纯化，His融合标签与其它标签相比有很多明显优势，是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。利用His标签可以建立基于融合蛋白的高效检测和纯化系统。而His抗体一般用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。

GST标签体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解从而除去GST蛋白。融合蛋白也是一个非常好的强免疫原，因此，很容易制备抗新蛋白的抗体。正是由于以上的优点，商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛应用。

如上所述，由于标签蛋白在蛋白表达及纯化中的巨大作用，标签蛋白被广泛的应用在诊断试剂中，如用于肝炎类、艾滋、梅毒等常见重要传染病及部分癌症疾病的诊断抗原都带有His标签或GST标签。

人源化抗体是指抗体的恒定区部分（即CH和CL区）或全部由人类抗体基因所编码。由于人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应，因此目前主要用作治疗性抗体。是利用DNA重组技术，将异源（动物源）单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中，转化哺乳动物细胞表达出嵌合抗体，这样表达的抗体分子中轻重链的可变区V区是异源的，而恒定区C区是人源的，整个抗体分子中近2/3部分都是人源的。将标签蛋白人源化嵌合抗体用作间接免疫检测反应的阳性对照物，到目前未见到报道。而以下本发明将其用作间接免疫检测反应的阳性对照物，并提供相应的反应检测试剂盒，并通过对比试验证明这一新的用途所带来的积极意义和优越效果。

发明内容

本发明提供了标签蛋白人源化嵌合抗体的一种新用途，以及由此产生的免疫检测试剂盒。本发明的技术方案如下：

一种采用标签蛋白人源化嵌合抗体作为阳性对照物的间接免疫检测方法，其步骤如下：

（1）针对要检测的靶标抗体，制备用于反应的包被有重组目标抗原的固相载体，

（2）制备阳性对照，

（3）在所述固相载体上进行间接免疫检测反应；

其特征在于：所述重组目标抗原指人工重组的带标签蛋白的目标抗原物，所述重组目标抗原中的目标抗原指能与所述靶标抗体特异性结合的抗原物；

所述阳性对照物采用抗重组目标抗原中的标签蛋白的人源化嵌合抗体，

所述人源化嵌合抗体是指抗体Fc端由人的抗体基因编码，抗体Fab端则由小鼠抗体的基因编码，即将标签蛋白的单克隆抗体的轻、重链可变区基因插入到含有人源抗体恒定区基因的表达载体中，转入动物细胞中表达得到的标签蛋白的人源化嵌合抗体。

所述标签蛋白的单克隆抗体指Flag、His、GST、GFP、myc或HA的单克隆抗体。

所述标签蛋白人源化嵌合抗体指His人源化嵌合抗体或GST人源化嵌合抗体。

所述阳性对照物溶于阳性对照稀释液中。

还包括用于承载检测反应的固相载体和阳性对照物，其特征在于：

所述固相载体上包被有重组目标抗原，