[发明专利]甲型、乙型肝炎联合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种甲型、乙型肝炎联合疫苗，其特征在于：包括有甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其中，所述甲型肝炎病毒抗原为甲型肝炎病毒经人胚肺二倍体细胞培养收获并纯化的甲型肝炎病毒抗原，其含量为630～660EU/ml，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量为重组酿酒酵母发酵表达并纯化的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其含量为15～30μg/ml。

2.如权利要求1所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗，其特征在于：还包括有免疫铝佐剂，其含量为0.35～0.62mg/ml。

3.如权利要求1所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗，其特征在于：所述甲型肝炎病毒抗原含量为640EU/ml。

4.如权利要求1所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗，其特征在于：所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量为20μg/ml。

5.如权利要求1-4中任一项所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗，其特征在于：所述的甲型肝炎病毒毒株为自分离的SH株。

6.如权利要求5所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗，其特征在于：所述的重组酿酒酵母菌种为美国默克公司以DNA重组技术构建的表达HBsAg的重组酿酒酵母。

7.一种甲型、乙型肝炎联合疫苗的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

甲型肝炎病毒抗原制备步骤，将甲型肝炎病毒经人胚肺二倍体细胞培养收获并纯化，得到甲型肝炎病毒抗原；

乙型肝炎病毒表面抗原蛋白制备步骤，将重组酿酒酵母发酵表达并纯化，乙型肝炎病毒表面抗原蛋白；

混合步骤，将所述甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白混合，调节pH值至6.0～7.0之间，制成甲型、乙型肝炎联合疫苗。

8.如权利要求7所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗的制备方法，其特征在于，所述甲型肝炎病毒抗原制备步骤具体包括：

甲肝病毒原液制备步骤，将甲型肝炎病毒毒株SH与人胚肺二倍体细胞混合吸附后接种至细胞工厂，于34-35℃下培养，至病毒增殖高峰期后，用胰酶消化含甲肝病毒的细胞，收获细胞病毒液，经超声破碎，氯仿抽提，超滤膜超滤，去除细胞杂蛋白，再经凝胶层析纯化，按抗原含量用磷酸盐缓冲液稀释至抗原含量不低于3200EU/ml后，过滤除菌，甲醛灭活，即得甲肝病毒原液；

甲型肝炎病毒抗原铝吸附产物制备步骤，将灭活后的甲肝病毒原液加入硫酸钾铝溶液吸附18-24小时后，用无菌生理盐水洗涤，去上清液后，用生理盐水稀释至抗原含量不低于3200EU/ml，制成甲肝病毒抗原铝吸附产物。

9.如权利要求8所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗的制备方法，其特征在于，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白制备步骤具体包括：

乙肝病毒表面抗原蛋白原液制备步骤，将美国默克公司以DNA重组技术构建的表达HBsAg的重组酿酒酵母工作种子批菌种经锥形瓶、种子罐、生产罐进行发酵培养，收获酵母菌，经高压匀浆器破碎酵母菌，滤膜过滤除去酵母菌碎片，以硅胶吸附法粗提HBsAg，疏水色谱法纯化HBsAg，用硫氰酸盐处理，按蛋白浓度用磷酸盐缓冲液稀释至抗原蛋白浓度为600-800EU/ml，除菌过滤后即为原液；

HBsAg吸附产物制备步骤，在原液中加入终浓度为100μg/ml甲醛，在34-38℃保温72-96小时灭活，灭活后蛋白质和铝剂按1μg蛋白质加入3.86mg的比例混合，置2-8℃吸附沉降18-24小时，用无菌生理盐水洗涤，去上清液后再恢复至原体积，制成HBsAg吸附产物。

10.如权利要求9所述的甲型、乙型肝炎联合疫苗的制备方法，其特征在于，所述混合步骤具体包括：

将甲肝病毒抗原铝吸附产物与HBsAg吸附产物等比例混合后，用0.1m0l/L的HCl调节pH值至6.0～7.0之间，制成甲型、乙型肝炎联合疫苗，其中含甲肝病毒抗原640EU/ml，HBsAg为20μg/ml。