[发明专利]甲型、乙型肝炎联合疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及肝炎疫苗领域，尤其涉及一种甲型、乙型肝炎联合疫苗及其制备方法。 

背景技术

病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的以肝脏损害为主的全身性急性或持续性传染病，在世界各地均有发病流行。在肝炎患者中30-50％属于甲型肝炎(简称甲肝)。甲肝是一种自限性疾病，但极易引起爆发流行，与当地社会、经济状况和卫生水平密切相关。全世界每年报道甲肝病例约140万，事实上，这个数值可能还要高出3-10倍；而乙型肝炎(简称乙肝)已有超过1/3的世界人口被感染。乙肝是乙肝病毒引起的疾病，在世界各国均有流行，我国属高流行区。WHO估计全世界约有36亿乙肝携带者，每年约有100万死于与之有关的慢性复杂性疾病和急性爆发死亡^[1]。尽管甲肝和乙肝的传播途径不一样，但大量报道，住院的肝炎患者有相当一部分同时感染甲肝和乙肝。由于甲肝和乙肝疫苗的使用，这两种肝炎的感染和流行得到了有效的控制。 

然而，随着国家扩大免疫计划，疫苗种类越来越多，免疫次数不断增多，免疫程序复杂，免疫成本也不断提高，也增加了漏种的机会。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种甲型、乙型肝炎联合疫苗，该疫苗可减少频繁的接种次数和漏种的机会，提高接种成功率，降低接种成本，为控制这两种肝炎的感染和流行提供了更为有效的途径，且具有良好的安全性、免疫原性和稳定性。 

本发明进一步所要解决的技术问题是：提供一种甲型、乙型肝炎联合疫苗的制备方法，该方法稳定可行，制备的联合疫苗具有良好的安全性、免疫原性和稳定性。 

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案： 

一种甲型、乙型肝炎联合疫苗，包括有甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病 毒表面抗原蛋白，其中，所述甲型肝炎病毒抗原为甲型肝炎病毒经人胚肺二倍体细胞培养收获并纯化的甲型肝炎病毒抗原，其含量为630～660EU/ml，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量为重组酿酒酵母发酵表达并纯化的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其含量为15～30μg/ml。 

优选地，还包括有免疫铝佐剂，其含量为0.35～0.62mg/ml。 

优选地，所述甲型肝炎病毒抗原含量为640EU/ml。 

优选地，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量为20μg/ml。 

优选地，所述的甲型肝炎病毒毒株为自分离的SH株。 

优选地，所述的重组酿酒酵母菌种为美国默克公司以DNA重组技术构建的表达HBsAg的重组酿酒酵母。 

相应地，本发明还公开了一种甲型、乙型肝炎联合疫苗的制备方法，该方法包括以下步骤： 

甲型肝炎病毒抗原制备步骤，将甲型肝炎病毒经人胚肺二倍体细胞培养收获并纯化，得到甲型肝炎病毒抗原； 

乙型肝炎病毒表面抗原蛋白制备步骤，将重组酿酒酵母发酵表达并纯化，乙型肝炎病毒表面抗原蛋白； 

混合步骤，将所述甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白混合，调节pH值至6.0～7.0之间，制成甲型、乙型肝炎联合疫苗。 

优选地，所述甲型肝炎病毒抗原制备步骤具体包括： 

甲肝病毒原液制备步骤，将甲型肝炎病毒毒株SH与人胚肺二倍体细胞混合吸附后接种至细胞工厂，于34-35℃下培养，至病毒增殖高峰期后，用胰酶消化含甲肝病毒的细胞，收获细胞病毒液，经超声破碎，氯仿抽提，超滤膜超滤，去除细胞杂蛋白，再经凝胶层析纯化，按抗原含量用磷酸盐缓冲液稀释至抗原含量不低于3200EU/ml后，过滤除菌，甲醛灭活，即得甲肝病毒原液； 

甲型肝炎病毒抗原铝吸附产物制备步骤，将灭活后的甲肝病毒原液加入硫酸钾铝溶液吸附18-24小时后，用无菌生理盐水洗涤，去上清液后，用生理盐水稀释至抗原含量不低于3200EU/ml，制成甲肝病毒抗原铝吸附产物； 

优选地，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白制备步骤具体包括： 

乙肝病毒表面抗原蛋白原液制备步骤，将美国默克公司以DNA重组技术 构建的表达HBsAg的重组酿酒酵母工作种子批菌种经锥形瓶、种子罐、生产罐进行发酵培养，收获酵母菌，经高压匀浆器破碎酵母菌，滤膜过滤除去酵母菌碎片，以硅胶吸附法粗提HBsAg，疏水色谱法纯化HBsAg，用硫氰酸盐处理，按蛋白浓度用磷酸盐缓冲液稀释至抗原蛋白浓度为600-800EU/ml，除菌过滤后即为原液；