[发明专利]老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法

权利要求书

1.老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1）外植体的消毒

把采挖到的老鸦瓣的鳞茎洗去表面泥土，待沥干后，用保鲜袋置于冰箱内低温保存，实验时取出，去掉干燥的根和地上部，加洗涤剂仔细刷洗，再用自来水冲洗，整个球茎浸入酒精溶液中，再泡入消毒液中消毒，无菌水冲洗，除去残余消毒液，将外植体放到已灭菌的滤纸上以除去多余的水分, 将鳞片材料切成1~3 cm²的小块，切成小块后按凹面朝上的方式接入到加有不同植物生长调节物质的MS培养基中；

2）小鳞茎诱导

外植体接入的MS培养基中添加的植物生长调节物质，所述的植物生长调节物质包括以下组分：

6-BA   0.5~5.0 mg/L；

TDZ    0.05~1.0 mg/L；

先进行暗培养，温度为25±1℃，培养条件为光/暗小时比为12~16:8~12，光照强度30~40 μmol/ｍ·s； 

3）仔细地将再生小鳞茎与外植体分开，如果分不开，可留少量外植体，插入到生根培养基中，所述的生根培养基中包括：

基本培养基  （1/4~1）MS 

NAA          0~0.5 mg/L

IAA          0.3~3.0 mg/L；

炼苗时可微开培养瓶盖进行炼苗，20~30h后取出并洗净根部附着的培养基，移入土中，土为小粉土，初期要做好保湿措施，并置于阴凉处，待新叶长出，即可除去烧杯。

2.根据权利要求1所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于步骤1）消毒液为滴加一滴1 mol/L NaOH的0.2%HgCl₂溶液。

3.根据权利要求2所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于步骤1）消毒时间为10~11 min。

4.根据权利要求1所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于步骤1）外植体采用剥去最外面的鳞片后的第一枚鳞片。

5.根据权利要求1~4任意一项权利要求所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于步骤2）中MS培养基中添加的植物生长调节物质的组成包括：

6-BA  1.0~4.0 mg/L

TDZ   0.1~0.8mg/L。

6.根据权利要求5所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于步骤2）中添加的植物生长调节物质选用TDZ 0.3 mg/L +6-BA 2.0 mg/L。

7.根据权利要求1所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于步骤3）生根培养基中包含肌醇，肌醇的含量为MS 中原含量的0~50%。

8.根据权利要求1、2、3、4或7所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于所述的生根培养基中NAA为0.05~0.2mg/L，IAA为0.5~2.0 mg/L。

9.根据权利要求8所述的老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于所述的生根培养基选用1/4MS+ NAA 0.1 mg/L +IAA 1.0 mg/L。