[发明专利]老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养与快速繁殖方法，尤其涉及一种老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法。

背景技术

老鸦瓣Tulipa edulis (Miq.) Bak.为百合科(Liliaceae)郁金香属多年生纤弱草本，分布于我国东北至长江流域各省。其除去膜质皮和绒毛后的干燥鳞茎入药，中药名为光慈姑，其性凉，味甘、辛，有小毒，具清热解毒、散结消肿之功效，主治咽喉肿痛、瘰疬结核、瘀滞疼痛、痈疖肿毒和蛇虫咬伤等症。近年发现，光慈姑具抗肿瘤作用发现老鸦瓣对小鼠的Lewis肺癌、S180实体瘤和肝癌均有显著抑制作用，且具体外抗人肝癌细胞株7721活性；也发现其在乳腺疾病等方面疗效显著，其需求也随之日益增加，但有性繁殖困难，主要靠地下鳞茎分球，故人工栽培繁殖系数低下，目前光慈姑主要自于野生的采挖，故导致供需矛盾也日益突出，且易导致野生资源枯竭。据此，研究老鸦瓣的传花生物学特性和种子萌发特性来试图解开其繁殖机理。

已经报道的老鸦瓣组织培养的研究：诱导出愈伤组织再分化出不定芽的老鸦瓣的组织培养模式，而且其诱导愈伤组织采用的是低6-BA浓度高NAA浓度，诱导不定芽采用的是高6-BA浓度低NAA浓度。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明的目的是提供一种老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，采用该方法进行老鸦瓣的组织培养与快速繁殖，可以从鳞片直接诱导出再生小鳞茎，不经过愈伤组织，提前了最早生根时间，提高了生根率和移栽成活率。

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1）外植体的消毒

把采挖到的老鸦瓣的鳞茎洗去表面泥土，待沥干后，用保鲜袋置于冰箱内低温保存，实验时取出，去掉干燥的根和地上部，加洗涤剂仔细刷洗，再用自来水冲洗，整个球茎浸入酒精溶液中，再泡入消毒液中消毒，无菌水冲洗，除去残余消毒液，将外植体放到已灭菌的滤纸上以除去多余的水分, 将鳞片材料切成1~3 cm²的小块，切成小块后按凹面朝上的方式接入到加有不同植物生长调节物质的MS培养基中；

2）小鳞茎诱导

外植体接入的MS培养基中添加的植物生长调节物质，所述的植物生长调节物质包括以下组分：

6-BA   0.5~5.0 mg/L；

TDZ    0.05~1.0 mg/L；

先进行暗培养，温度为25±1℃，培养条件为光/暗小时比为12~16:8~12，光照强度30~40 μmol/ｍ·s； 

3）仔细地将再生小鳞茎与外植体分开，如果分不开，可留少量外植体，插入到生根培养基中，所述的生根培养基中包括：

基本培养基  （1/4~1）MS 

NAA           0~0.5 mg/L

IAA          0.3~3.0 mg/L；

炼苗时可微开培养瓶盖进行炼苗，20~30h后取出并洗净根部附着的培养基，移入土中，土为小粉土，初期要做好保湿措施，并置于阴凉处，待新叶长出，即可除去烧杯。

作为优选，上述的步骤1）消毒液为滴加一滴1 mol/L NaOH的0.2%HgCl₂溶液。作为再优选，上述的消毒时间为5~6 min。

作为优选，上述的步骤1）外植体采用剥去最外面的鳞片后的第一枚鳞片。

作为优选，上述的步骤2）中MS培养基中添加的植物生长调节物质的组成包括：

6-BA  1.0~4.0 mg/L

TDZ   0.1~0.8mg/L。

作为最优选，上述的步骤2）中添加的植物生长调节物质选用TDZ 0.3 mg/L +6-BA 2.0 mg/L。

作为优选，上述的步骤3）中生根培养基中包含肌醇，肌醇的含量为MS 中原含量的0~50%。

作为优选，上述的步骤3）中生根培养基中NAA为0.05~0.2mg/L，IAA为0.5~2.0 mg/L。

作为最优选，上述的步骤3）中生根培养基选用1/4MS+ NAA 0.1 mg/L +IAA 1.0 mg/L。

本发明由于采用了上述的技术方案，采用该方法进行老鸦瓣的组织培养与快速繁殖，可以从鳞片直接诱导出再生小鳞茎，不经过愈伤组织，提前了最早生根时间，提高了生根率和移栽成活率。

具体实施方式