[发明专利]一种人类PMSCS体外免疫调控淋巴细胞分子机制的检测方法无效
| 申请号： | 201210506446.2 | 申请日： | 2012-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN103018457A | 公开（公告）日： | 2013-04-03 |
| 发明（设计）人： | 徐杰;房文峰;朱爱华 | 申请（专利权）人： | 吴卫江 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N21/64;G01N23/00 |
| 代理公司： | 常州市维益专利事务所 32211 | 代理人： | 何学成 |
| 地址： | 214041 江苏省无*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人类 pmscs 体外 免疫 调控 淋巴细胞 分子 机制 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种人类PMSCS体外免疫抑制作用分子机制的检测方法，其包括下述步骤：
S1：PMSCS分离培养与鉴定；
S2：免疫荧光染色法检测PMSCS中PD-L1表达；
S3：PD-L1mAb阻断PMSCS对T细胞增殖的抑制作用检测；
S4：PMSCS与T细胞体外共培养及PD-L1阻断实验；
S5：T细胞活性早期标志CD69的检测；
S6：PMSCS对活化T细胞周期影响的检测；
S7：PMSCS对活化T细胞细胞因子分泌影响的检测。
2.如权利要求1所述的一种人类PMSCS体外免疫抑制作用分子机制的检测方法，其中所述步骤1PMSCS的分离及培养过程如下：取足月破腹产胎儿的胎盘，取胎儿面的蜕膜组织，机械分散后用胶原酶消化，100目筛网过滤后形成单细胞悬液，离心后加入全培养基，37℃,5%CO2条件下静置培养，待细胞生长铺满瓶底80%-90%时进行传代，培养三代后的细胞用于实验。
3.如权利要求1所述的一种人类PMSCS体外免疫抑制作用分子机制的检测方法，其中所述步骤3开始使用的人外周血T淋巴细胞的分离纯化方法如下：取健康人外周血用淋巴细胞分离液常规分离外周血单个核细胞，贴壁后吸出富集的T细胞，再经磁珠分选纯化，纯化后的T细胞纯度达到95%以上。
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