[发明专利]一种氯羟吡啶胶体金层析检测试纸条或卡

权利要求书

1.一种氯羟吡啶胶体金层析检测试纸条或卡，包括衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜、玻璃吸水垫，其特征在于：所述金标结合垫为吸附有胶体金标记的抗氯羟吡啶单克隆抗体或多克隆抗体玻璃纤维棉，在所述硝酸纤维素膜上有用氯羟吡啶-载体蛋白偶联物印制的隐形检测线，用山羊抗小鼠IgG印制的隐形对照线。

2.根据权利要求1所述的氯羟吡啶胶体金层析检测试纸条或卡，其特征在于，所述的隐形检测线和隐形对照线平行排列组合为“||”。

3.根据权利要求1所述的试纸条或卡，其特征在于，所述金标物结合垫为：将1∶100～1∶500稀释(体积比)的胶体金标记抗体吸附于玻璃纤维棉中，4℃低温真空干燥，制备CLOP金标物结合垫。

4.根据权利要求3所述的试纸条或卡，其特征在于，所述胶体金标记抗体制备方法为：将稀释后的胶体金和单克隆抗体或多克隆抗体按照不同的浓度倍比，选择胶体金显色红色的最小稀释浓度作为胶体金标记抗体的最佳量，用于胶体金标记抗体的制备。

5.根据权利要求4所述的试纸条或卡，其特征在于，所述单克隆抗体或多克隆抗体的制备方法为：

A1、氯羟吡啶半抗原的改造：亲核取代反应引入酯键，然后在碱、酸的作用下，合成含有羧基的氯羟吡啶半抗原；

A2、CLOP-2C-载体蛋白人工抗原的合成：采用活泼酯法合成CLOP人工免疫原，称取75mg CLOP半抗原溶解于3mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入二环己基碳二亚胺35mg和N-羟基琥珀酰亚胺18mg，在室温下磁力搅拌反应过夜12h，此液为A；称取20mgBSA溶于2mL 0.01mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液溶液中，此液为B；将反应液B置于磁力搅拌器上，4℃下将反应液A缓慢滴加到反应液B中，搅拌反应过夜。次日将反应液置于经过预处理的透析袋内，在PBS中搅拌透析7天，得到偶联产物CLOP-2C-BSA，分装上清液，冻存于-20℃冰箱中，备用；

A3、氯羟吡啶单克隆抗体和多克隆抗体的获得：用CLOP-2C-BSA免疫6周雌性BALB/C小鼠5只，剂量为50μg/0.2mL/只，背部皮下分点注射。采用细胞融合技术无菌取脾脏制备脾细胞，在聚乙二醇-1500作用下与NS0骨髓瘤细胞进行融合；用间接ELISA法和阻断ELISA法进行阳性孔筛选，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化，扩大培养、冻存并鉴定，获得一株杂交瘤细胞株；之后采用体内诱生腹水法制备CLOP mAb；

多抗制备：用CLOP-2C-BSA载体蛋白结合抗原免疫新西兰白兔，免疫剂量为50μg～100μg/次，背部皮下分多点注射；首免，用合成的人工抗原与等量弗氏完全佐剂乳化；加强免疫，用合成的人工抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，连续免疫4～5次，每次间隔4～8周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法测其定效价达到105以上时，采血并分离收集高免血清。以饱和硫酸铵盐析法提取IgG抗体，-20℃冻存备用。