[发明专利]相思树花粉离体培养活力检测技术

说明书

技术领域：

本发明属于植物杂交育种技术领域，涉及一种相思树花粉离体培养活力检测的技术。

背景技术：

相思树（Acacia confusa）属含羞草科(Mimosaceae)金合欢属(Acacia)植物，自然分布于澳大利亚昆士兰、巴布亚新几内亚及印度尼西亚等湿润热带地区。相思树具有生长迅速、树冠浓密、落叶量多、根瘤固氮及耐干燥瘠薄的特性，材质优良，可用作纸浆材、建筑材、家具用材等。我国自上世纪60、70年代引种相思树以来，相思树树种的良种选育与栽培研究一直受到重视，不仅成功筛选出各地适生种源，选育出一批优良家系和无性系，也系统掌握了采种、育苗、造林、抚育管理等一套成熟的栽培技术，取得了丰硕成果。并在海南、广东、广西等地营建了多个相思树种子园，旨在为相思树推广提供高质量的种子。然而，现存的一些问题制约了种子园的产量和质量。例如极端气候异常导致的寒害、人工授粉很难开展、结荚率低下等原因，使种子园不能够有效地发挥其应有的功能，极大地限制了相思树长期可持续发展及研究利用。因此，开展相思树植物的生殖生物学领域的研究显得尤为紧迫。

花粉生活力是花粉具有存活、生长、萌发或发育的能力。在农业和林业的常规育种中,为了进行人工辅助授粉或杂交授粉，需要早期采集和贮存花粉。在使用采集和贮存花粉之前,通常要做花粉生活力的鉴定。因此，掌握花粉生活力检测的方法对于提高植物育种效率具有较高的实际应用价值。

花粉萌发率是鉴定花粉生活力的一项重要指标。提取花粉在培养基上萌发，在光学显微镜下用常规方法观察花粉的萌发率，以此作为花粉生活力的标准。不同植物花粉萌发所需要的培养基成分、浓度和培养的环境条件不同。离体萌发测定法可以直观区分死亡或缺乏活力的花粉，数据科学可靠，并可完全定量，对于许多植物都与结实和种子形成有相关性，故仍为目前杂交育种中花粉生活力测定的首选方法。

发明内容：

本发明的目的是针对相思树杂交育种花粉活力检测的需要，提供一种相思树花粉离体培养活力检测的方法。

本发明的技术方案是：

本发明是利用植物花粉在适宜的培养基中，活力强的花粉可发芽，活力小的花粉不发芽或发芽率低这一原理，通过采集发育良好的相思树花序，将花粉播于配制好的液体培养基中，在一定的条件下让其发芽，一定时间后在光学显微镜下用常规方法观察花粉的发芽率，从而检测出相思树花粉的活力。

本发明是这样实现的：

一种相思树花粉离体培养活力检测方法，包括液体培养基的配制、花枝采摘、花粉播种、培养、光学显微镜观察计数发芽花粉等工序；在相思树花开时节，采集含有多穗新鲜花序的花枝，从花枝上摘取当日开放的新鲜花序分切成多段，以水沉法播种，在一定的温度、湿度、富氧环境条件下培养使其发芽，具体操作步骤如下：

(1)液体培养基的配制：用蔗糖、硼酸、硝酸钙、去离子水按一定的浓度混合均匀；

(2)花枝采摘：剪取有多穗已全面开放花序的新鲜花枝，下端插入装有清水的小桶，拿回试验室备用；

(3)花粉播种：取凹玻片平放于桌面，用滴管取配制好的培养基2～3滴滴于凹玻片的凹槽内，用镊子摘取花序以水沉法播种，播种后不盖盖玻片；

(4)花粉培养：取干净大号培养皿，底部垫上滤纸，滴入去离子水将滤纸浸湿，将凹玻片平放入培养皿中，置于一定环境条件下培养； 

(5)光学显微镜观察：培养一定时间后将凹玻片置于光学显微镜下用常规方法观察花粉发芽状况。

以上所述的液体培养基的组分和体积质量浓度是：蔗糖15%～20%，硼酸100mg/L～150 mg/L，硝酸钙0.25 mmol/L～0.5mmol/ L，其余为水。

以上所述花序是指长在花枝上的一穗花，一个花序通常含有近百朵小花。 

以上所述新鲜花枝是于早上7点钟前采集，花枝上有多穗花序于当日凌晨全面开放且未被访花昆虫采访的花枝。

以上所述的水沉法播种是指从花枝上摘下当日开放的新鲜花序，分切成多段，用镊子断取约有6～9朵小花的花序段，在液体培养基中涮1圈，花粉粒自然沉入液体培养基中。

以上所述的环境条件是让培养基中的花粉与空气直接接触而富氧，并控制温度26℃～30℃，湿度85%～90%。

以上所述光学显微镜下用常规方法观察是在花粉培养8小时后进行检测。

本发明相对于现有的技术具有以下优点：