[发明专利]一种重组淀粉脱支酶发酵生产工艺

权利要求书

1.一种淀粉脱支酶的发酵生产方法，其特征在于以含有重组淀粉脱支酶编码基因的大肠杆菌为生产菌株，发酵工艺如下：

将活化后的种子培养液接入发酵培养基中，通过控制搅拌转速和通风量使溶氧维持20-30％，控制温度为25-37℃，流加氨水控制pH 7.0±0.5，培养5-6小时；

待溶氧上升至80-100％，以指数流加的方式补加补料液使溶氧维持在20-30％，温度维持在25-37℃，流加氨水控制pH 7.0±0.5，在发酵过程中添加适量的甜菜碱，当菌体OD₆₀₀达到15-30时补加0.75-1.5％(m/V)的甘氨酸；

继续培养至菌体吸光度OD₆₀₀达到45-60时，通过补加乳糖溶液，使发酵液剩余乳糖浓度控制在4-6g/L；同时溶氧控制在20-30％，控制pH 7.0±0.5，诱导5-20小时，添加吐温80后再继续发酵1-10小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述甜菜碱的添加量为5-200mmol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述甜菜碱的添加方式为一次性添加，分批添加或者连续流加。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述甜菜碱的添加时机为0h-对数生长后期。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述Tween 80的添加量为1-10g/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于种子活化用培养基的组成为：工业级蛋白胨10g/L，工业级酵母粉5g/L，NaCl 10g/L，pH 7.10。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基的组成为：甘油6g/L，工业级蛋白胨12g/L，工业级酵母粉24g/L，KH₂PO₄2.31g/L，K₂HPO₄3H₂O 16.43g/L，微量元素液10mL/L。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述种子培养基中还含有氨苄青霉素，浓度为100mg/L。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述发酵培养基中还含有氨苄青霉素浓度为100mg/L。